[发明专利]一种干细胞制剂及其在血管介入治疗脑卒中的用途

说明书

本发明公开了一种新型干细胞制剂及其在血管介入治疗脑卒中的用途，并且提供了所述干细胞制剂中干细胞的制备方法和步骤，及其在用于制备治疗脑卒中患者的药物中的用途。本发明新型干细胞制剂移植后取得了优良效果，并且制备成本低廉，得到的细胞容易大量扩增，为脑卒中等神经系统疾病的治疗开辟了新的天地，为脑卒中患者带来了福音。该制剂的干细胞具有较高的分化程度，在血管介入治疗脑卒中时能促进病人神经功能恢复，提高细胞定植率，并且易于制备，便于应用，疗效较同类药物有明显提升。

技术领域

本发明属于生物技术与再生医学领域，尤其涉及一种干细胞制剂及其在血管介入治疗脑卒中的用途。

背景技术

脑卒中是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，是全球第二位致死原因和首位致残原因，约一半左右的幸存者永久残疾。中国疾病预防控制中心数据显示脑卒中也是我国首位致残原因和致死原因，我国脑卒中病人700多万，发病率每年上升8.7%，每年约有160万人死于脑卒中，死亡率为157/10万人。与其他国家相似，缺血性脑卒中是我国最常见的脑卒中类型，约占所有脑卒中的43-79%。因此脑卒中是现在以及将来很长一段时间内人类必须面对的重大公共卫生问题之一。

多数研究认为，脑卒中患者的救治需要快速恢复脑血流、抢救缺血脑组织，迄今唯一有效的治疗方法是血管再通。对于前循环大血管闭塞所致的缺血性卒中患者，采用新一代支架样取栓装置为主的多模式再通术的疗效优于标准的药物治疗（包括静脉溶栓）。此循证医学证据源于欧美澳等国家临床数据，而作为脑卒中已成为第一位致死和致残性疾病的中国却是旁观者。目前，关于急性缺血性脑卒中诊治方面的工作刚刚迎来春天，还有很多工作值得去做。研究发现脑组织如果长时间严重缺血缺氧，即使在后期恢复脑血流，仍会对脑组织造成不可逆转的损伤。因此，当前仍迫切需要研究针对缺血缺氧和（或）再灌注所致病理生理学事件的治疗策略。

近年来国内外多例研究发现，干细胞移植对缺血性脑卒中起到非常积极的作用。在动物、离体实验以及部分临床研究中，干细胞被证明对神经功能损伤有明显的保护和治疗作用。神经干细胞(nerual stem cell，NSC)是具有自我更新能力，并能转化为各种神经组织细胞(包括神经元、神经星形胶质细胞和少突胶质细胞等)的一类细胞。在遭受神经损伤或特定细胞因子存在的条件下，NSC能够被激活并分化为神经元或神经胶质细胞，参与损伤部位的修复。神经干细胞移植后能够在宿主脑内存活、迁移和分化为神经元和星形胶质细胞。NSC移植后能够明显减轻胶质瘫痕形成，增加内源性神经元和神经胶质细胞的前体细胞的存活率和功能，并且可通过释放可溶性因子和表达免疫相关受体促进旁路免疫调节从而改变病变周围的免疫环境。因此，以NSC移植为基础的治疗在多种缺血性脑卒中症状治疗中具有重要的临床应用价值。

目前，利用干细胞移植治疗脑卒中主要面临的问题就是，移植后的神经干细胞分化为神经细胞的程度仍然较低，对于患者的治疗效果有待进一步提升。本领域仍需要开辟新的方法和途径，以获得更好的具有临床效果的干细胞及制剂并用于脑卒中的治疗上，从而促进干细胞及其制剂的改良，进一步造福于人类神经系统疾病患者，改善其生活质量。

发明内容

为解决目前干细胞移植治疗脑卒中面临的问题，本发明的目的在于提供一种干细胞制剂及其在血管介入治疗脑卒中的用途。

经实验表明，以往的用脑卒中治疗的干细胞的常用诱导方法是在F12基础培养基中添加EGF成分，此种方法培养出来的干细胞分化程度较低，且不能保证NSC向预想的方向分化而影响治疗效果。本发明在此基础上进行改良制备的用于脑卒中治疗的干细胞，以免疫细胞化学染色的方法鉴定其标记物的表达，包括神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经微管相关蛋白-2（MAP-2），证实本发明可明显提高体外培养干细胞向NSC分化的程度，进而大大提升了对病人的治疗效果，并且制备成本低廉。配合血管介入法经股动脉注射施用，提高了细胞的定植率。

本发明还提供了一种用于脑卒中治疗的干细胞的制备方法及其用于制备治疗脑卒中患者的药物中的用途。