[发明专利]一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法

说明书

本发明涉及一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法；制备方法为，在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物Ⅰ；在所得混合物Ⅰ中加入二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为1 mol/L的氢氧化钠，60℃的温度下，搅拌12‑14小时，得到环氧活化磁珠；所得环氧活化化磁珠中加入碳酸氢钠溶液和乙二胺，50℃下缓慢震荡20小时，得到处理后环氧活化磁珠；所得处理后环氧活化磁珠中加入氢氧化钠溶液和碳酸氢钠溶液，混合均匀后加入溴乙酸，室温下搅拌，制备出连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠；本发明的方法简单，所制备出的金属螯合磁珠，其金属结合能力强，结合容量大,可用于移除溶液及生物大分子中的金属离子。

技术领域

本发明涉及一种金属螯合磁珠，具体的说是一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法。

背景技术

在溶液中，金属离子往往和蛋白质、核酸、糖等生物大分子结合在一起，影响我们对这些生物大分子的结构和功能的分析。现有获得脱金属方法是通过加入高浓度的低分子量螯合剂，如EDTA和EGTA等，或者通过金属螯合琼脂糖凝胶。前者在移除螯合剂金属复合物的同时缓冲液中的金属离子会重新与大分子结合，影响脱金属效果。目前广泛使用琼脂糖凝胶来对生物大分子进行脱金属处理。琼脂糖的粒度均匀，表面有密度适宜的可反应的活性基团，便于连接金属螯合基团。中国专利申请“四配位体金属螯合层析填料乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶制备方法”（申请号CN200910196910.0）和“一种金属螯合琼脂糖凝胶的制备方法及其应用” （申请号CN201110329239.X）公开的方法，采用结合了乙二胺二乙酸（EDDA）或乙二胺二琥珀酸（EDDS）的琼脂糖凝胶进行金属离子的螯合，由于EDDA提供4个金属配位体，EDDS提供6个金属配位体，制得的琼脂糖凝胶的金属螯合能力要比亚氨基二乙酸（IDA，金属配位数为3）的强。但是琼脂糖凝胶在较低压力下结构就会产生压缩破坏，为提高其机械强度，常采用增加交联度的办法，但交联后的琼脂糖凝胶吸附性大大下降；另一方面，琼脂糖凝胶的热稳定性也较差，50℃以上就开始水解，这些缺点使其不能完全满足目前的研究需要。

磁珠是近年来发展起来并已广泛应用于医学生物学领域的一种多功能试剂，它由磁性内核和核外包裹的高分子外壳两部分组成，利用磁核对外磁场的响应，可以将磁珠从周围介质中迅速分离出来。中国专利申请“一种金属螯合纳米磁珠，其制备方法及其应用”（申请号CN200610002030.1）公开了一种连接IDA的纳米磁珠，该磁珠与金属离子螯合后，金属离子（如六配位金属Ni、Cu、Co和Ca等）上还剩余三个空轨道可以与具有金属结合位点的蛋白质结合，因此以IDA为螯合基制成纳米磁珠吸附蛋白质能力较强，能较好地用于溶液中金属结合蛋白的分离和鉴定，但并不能从大分子中有效地移除金属离子。

发明内容

本发明的目的是提供一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，所制备出金属螯合磁珠，其金属结合能力强，结合容量大,可用于移除溶液及生物大分子中的金属离子。

一种连接三羧甲基乙二胺的金属螯合磁珠制备方法，包括以下步骤：

步骤一、羟基磁珠的活化：在羟基磁珠中加入碱液进行活化，得到含活化后羟基磁珠和碱液的混合物Ⅰ，备用；所述碱液的加入量为使混合物Ⅰ的pH值达到12-14；

步骤二、环氧化：按照混合物Ⅰ、二甲亚砜、环氧氯丙烷和氢氧化钠溶液的体积比为1:2:1: 4的比例，在上述步骤一所得混合物Ⅰ中加入二甲亚砜、环氧氯丙烷和浓度为1 mol/L的氢氧化钠，60℃的温度下，搅拌12-14小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，即得到环氧活化磁珠，备用；

步骤三、在每10mg上述步骤二所得环氧活化化磁珠中加入3ml碳酸氢钠溶液和2ml乙二胺，置于50℃下缓慢震荡20小时，除去溶液，所得磁珠洗至中性，得到处理后环氧活化磁珠，备用；