[发明专利]一种单染色分离方法、单染色体高通量测序文库的构建方法及应用

权利要求书

1.一种单染色分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

S01)模拟实验

采用随机数产生方法建模，获得验证实验所需要的稀释容器的最佳数目，包括如下步骤：

a)待分析物种染色体数记为X，并分别编号为S_n，n＝1-X，n和X为自然数；

b)在1-Z个数中随机产生X个数；将X个数分别对应为染色体编号，每个S_n各对应X个数中的一个数值；将Z个数均等分布在N个稀释容器中，其中Z、X为自然数，Z不小于X；重复步骤b)T次；

c)计算步骤b)T次模拟实验中，每次模拟实验后各稀释容器中对应的数字，记录为对应染色体的种类和数量；

d)将所有模拟实验步骤c)所得的数据进行统计学分析，获得如下PHC、及P1～P3四个参数：1)处于同一个稀释容器中的同源染色体的数量，记为PHC；2)将所有同源染色体完全分开的实验的频率，记为P1；3)只含有1条染色体的稀释容器的频率，记为P2；4)完全不含染色体的稀释容器的频率，记为P3；综合四个参数评估出总共所需要的稀释容器的最佳数目Q，其中，Q为不大于N的自然数。

S02)进行验证实验

获得待分析物种分裂中期至中后期任一阶段的单细胞，取全部染色体，采用梯度稀释法将全部染色体稀释到Q个稀释容器中，获得至少有1个为仅含有单染色体的稀释容器。

2.如权利要求1所述的单染色分离方法，其特征在于，所述步骤S01)中的步骤b)之前还包括：确定Z和T值。

3.如权利要求1所述的单染色分离方法，其特征在于，所述步骤S01)中的步骤b)中，Z为2ⁿ，n＝6～16。

4.如权利要求1所述的单染色分离方法，其特征在于，所述步骤S01)中的步骤b)中，N为4-256中任一自然数。

5.如权利要求1所述的单染色分离方法，其特征在于，所述步骤S02)中，梯度稀释法对染色体进行稀释的步骤包括：

1)将Q或者R进行因式分解，得Y＝y*2ⁿ，其中，Y＝R或Q，n为自然数，R＝Q±2k，k、R为自然数；

2)取1个稀释容器，在稀释容器中先后加入细胞裂解液和1个单细胞，孵育，得细胞悬液，总体积为V₁；

3)将步骤2)所得细胞悬液等体积分配在y个稀释容器中，并在每个稀释容器中补足超纯水至体积为V₁，并混匀；

4)将步骤3)中每个稀释容器中溶液的一半分别置于新的稀释容器中，得y*2个稀释容器，并在每个稀释容器补足超纯水至体积为V₁，并混匀；

5)重复步骤4)共n次，最后获得Y个含有细胞悬液的稀释容器；在Y稀释容器中，至少有1个为仅含有单染色体的稀释容器。

6.如权利要求5所述的单染色分离方法，其特征在于，所述步骤S02)中的步骤1)中，所述Y＝8、16、24和32中的至少1种。

7.一种单染色体高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

将权利要求1所得的单染色体进行扩增，得到单染色体高通量测序文库。

8.如权利要求7所述的单染色体高通量测序文库的构建方法，其特征在于，对单染色体高通量测序文库进行高通量测序，并对测序结果进行生物信息学分析，获得各稀释容器中的单染色体的种类和数量，以及所有单染色体的序列信息。

9.一种采用稀释法对染色体进行分离获得单个的染色体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将Q或者R进行因式分解，得Y＝y*2ⁿ，其中，Y＝R或Q，n为自然数，R＝Q±2k，k、R为自然数；

2)取1个稀释容器，在稀释容器中先后加入细胞裂解液和1个单细胞，孵育，得细胞悬液，总体积为V₁；

3)将步骤2)所得细胞悬液等体积分配在y个稀释容器中，并在每个稀释容器中补足超纯水至体积为V₁，并混匀；

4)将步骤3)中每个稀释容器中溶液的一半分别置于新的稀释容器中，得y*2个稀释容器，并在每个稀释容器补足超纯水至体积为V₁，并混匀；

5)重复步骤4)共n次，最后获得Y个含有细胞悬液的稀释容器；在Y稀释容器中，至少有1个为仅含有单染色体的稀释容器。