[发明专利]一种GII.4型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法有效
| 申请号： | 201510487540.1 | 申请日： | 2015-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN105039330B | 公开（公告）日： | 2018-04-03 |
| 发明（设计）人： | 薛亮;吴清平;蔡伟程;寇晓霞;张菊梅 | 申请（专利权）人： | 广东省微生物研究所;广东环凯微生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510070 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 gii 型诺如 病毒 基因组 扩增 引物 方法 | ||
1.一种GII.4型诺如病毒基因组扩增引物，其特征在于，包括六对扩增引物：
引物对1：P1F：5'-GTGAATGAAGATGGCGTCTAAC-3'；
P1596R：5'-TCGACGCCATTGCGTGGGA-3'；
引物对2：P1258F：5'-CAACCATATGACCACCTTGCT-3'；
P2805R：5'-ATGGCCACCTCCTCATAGTA-3'；
引物对3：P2689F：5'-AGGTCTCAGTGATGAAGAG-3'；
P4248R：5'-GGGCCATCCTCATTCATATTCA-3'；
引物对4：P4099F：5'-TGGTAAGATCAAGAAGAGGCT-3'；
G2SKR：5'-CCRCCNGCATRHCCRTTRTACAT-3'；
引物对5：NV2of2：5'-GGAGGGCGATCGCAATC-3'；
GV132：5'-CCRGCRAAGAAAGCTCCAGCCAT-3'；
引物对6：P6484F：5'-CAGCACAATCTGATGTGGC-3'；
P7513R：5'-TTACACCCGTGACTCCCCT-3'。
2.一种GII.4型诺如病毒基因组的扩增方法，其特征在于，分别以权利要求1所述的引物对P1F/P1596R、P1258F/P2805R、P2689F/P4248R、P4099F/G2SKR、NV2of2/GV132和P6484F/P7513R作为扩增引物的上下游引物，以GII.4型诺如病毒的RNA为模板进行RT-PCR扩增，分别得到扩增产物，然后对扩增产物进行核酸序列测序，然后再拼接比对，得到GII.4型诺如病毒基因组全长序列。
3.根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反应体系为：含有2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由双蒸水补足至20μL，反应条件为：50℃反转录30min，94℃预变性3min，然后94℃30s，55℃30s，72℃80s，共30次循环后，72℃最后延伸7min。
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