[发明专利]抗菌肽-溶菌酶融合蛋白的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201510486586.1 | 申请日： | 2015-08-11 |
| 公开（公告）号： | CN105061603B | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 舒建洪;王伟东;吕正兵;姜卫亮;徐华强 | 申请（专利权）人： | 浙江益肽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/36;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/47;A61P31/04;A61P1/12;A61P11/00 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 | 代理人： | 沈亚芳 |
| 地址： | 324022 浙江省衢州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗菌 溶菌酶 融合 蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种抗菌肽-溶菌酶融合蛋白，其特征在于：该蛋白从N端-C端依次包含了抗菌肽thanatin蛋白、3GSA柔性肽、T4溶菌酶蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的抗菌肽-溶菌酶融合蛋白的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
3.权利要求1所述的抗菌肽-溶菌酶融合蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）采用人工合成的方法获得依次包含抗菌肽thanatin基因序列、3GSA柔性肽基因序列、T4溶菌酶基因序列的tha-3GSA-T4基因序列，如SEQ ID NO.6所示；
（2）以pETDuet质粒为载体，构建pETDuet-Sumo-tha-3GSA-T4重组质粒，并转化至大肠杆菌Top10中，通过鉴定、筛选，得到阳性克隆；
（3）将阳性克隆转化至大肠杆菌宿主菌BL21中，通过氨苄青霉素抗生素的筛选获得表达菌株；
（4）挑取pETDue-sumo-tha-3GSA-T4/BL21单克隆至LB培养基，LB培养基中含50ug/ml氨苄青霉素，37℃培养至OD600 为0.75-0.85，加入终浓度0.1mM的IPTG进行蛋白诱导，诱导条件为16℃培养16-20h，得到在上清表达的Sumo-tha-3GSA-T4融合蛋白；
（5）对得到的Sumo-tha-3GSA-T4融合蛋白进行纯化，然后切除Sumo标签，得到抗菌肽-溶菌酶融合蛋白。
4.权利要求1所述的抗菌肽-溶菌酶融合蛋白在制备提高仔猪成活率的药物中的应用。
5.权利要求1所述的抗菌肽-溶菌酶融合蛋白在制备降低保育猪腹泻率的药物中的应用。
6.权利要求1所述的抗菌肽-溶菌酶融合蛋白制备降低保育猪呼吸道病发病率的药物中的应用。
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