[发明专利]适用于选育具备红皮性状的柚子共显性RFP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种适用于选育具备红皮性状的柚子共显性RFP分子标记，其特征在于：其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。

2.用于获得权利要求1所述分子标记的引物对，其特征在于：所述引物对分别为：

引物对RFP F/R1

正向引物5'-CATTCATACAGGACTCGACTAGCTT-3'，

反向引物5'-TGTATGAATGGGACCTGTCTATGG-3'；

引物对RFP F/R2

正向引物5'-GGATGACGGGAGATGTTTGTTAC-3'，

反向引物5'-TCCTTACCTCCTTTTTGGACCTA-3'。

3.一种权利要求1所述适用于选育具备红皮性状的柚子共显性RFP分子标记制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)以红皮柚和普通柚两个基因组DNA为模板，采用引物对MYB2F/R：正向引物5'-TGGAGAGACCCACGGAAAGA-3'，

反向引物5'-TCTTCTTACAGTCCAGGACCCTTT-3'；

扩增调控花青素合成关键转录因子CgMYB2基因的启动子，得到两个DNA扩增片段；

2)对所述的DNA扩增片段进行克隆、测序，其中从红皮柚中扩增得到如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，从CK柚中扩增得到如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

3)将所述的SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的核苷酸序列进行比对发现，在SEQ ID NO：1中间有一段162bp的插入突变，导致序列特异扩增区域多态性；

4)根据SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列差异设计引物对RFP F/R1和RFP F/R2：

引物对RFP F/R1

正向引物5'-CATTCATACAGGACTCGACTAGCTT-3'，

反向引物5'-TGTATGAATGGGACCTGTCTATGG-3'；

引物对RFP F/R2

正向引物5'-GGATGACGGGAGATGTTTGTTAC-3'，

反向引物5'-TCCTTACCTCCTTTTTGGACCTA-3'；

以红皮柚和普通柚两个基因组DNA为模板，采用引物对RFP F/R1和RFP F/R2进行PCR扩增，得到如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的能够区分红皮柚与普通柚的共显性RFP分子标记。

4.权利要求1所述的分子标记在辅助选择红皮柚的应用。

5.权利要求2所述的特异性引物对RFP F/R1和引物对RFP F/R2在选育红皮柚的应用。