[发明专利]一种基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法

权利要求书

1.一种基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，包含下述步骤：

(1)提取待测肉制品的基因组DNA；

(2)设计并合成COI通用引物序列，其中，正向引物如SEQ ID NO:1所示，反向引物如SEQ ID NO:2所示；

(3)采用步骤(2)中所述的正向引物和反向引物，以步骤(1)中所提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增，然后对PCR产物进行纯化；

(4)对步骤(3)中纯化后PCR产物进行定量，并等量混样，构建标准文库，然后进行高通量测序；

(5)根据步骤(4)中测序的结果，得到待测肉制品的COI序列信息，由此得出待测肉制品的材料来源。

2.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，分别在SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的5’端连接7碱基条形码，得到条形码通用引物，用于所述PCR扩增反应。

3.根据权利要求2所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述7碱基条形码的序列为ACACAGT或CAGAGTC。

4.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(3)中进行PCR扩增的反应体系组成为：基因组DNA模板2μl、5U/ul的Q5聚合酶0.25μl、Q5 Reaction Buffer(5×)、Q5 GC high Enhancer(5×)、2.5μM dNTP 2μl、10μM的正向引物1μl、10μM的反向引物1μl，加ddH₂O至25μl。

5.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(3)中进行PCR扩增的反应程序为：98℃预变性30s，然后以98℃变性30s、52℃退火30s、72℃延伸30s为一个循环，进行27个循环，最后72℃延伸5min，4℃至无穷。

6.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用胶回收试剂盒对PCR产物进行纯化。

7.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(4)中采用美国Biotek FLX800荧光分析仪进行定量。

8.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(4)中采用Illumina文库构建试剂盒进行标准文库的构建。

9.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，所述步骤(4)中采用Illumina MiSeq测序平台进行高通量测序。

10.根据权利要求1所述的基于短序列高通量测序检测肉制品材料来源的方法，其特征在于，述步骤(5)中根据待测肉制品的COI序列信息得出待测肉制品的材料来源的方法是：将待测肉制品的COI序列信息，与已知物种的COI基因序列进行比对，从而得出待测肉制品的材料来源。