[发明专利]一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法

权利要求书

1.本发明一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，其特征在于试剂的主要组分：

（1）10*反应缓冲液^※1

（2）dNTPMixture:10mMeach

（3）甜菜碱：5mol/L

（4）MgSO₄：150mmol/L

（5）Bst酶：8000U/mL

（6）染料：钙黄绿素4mmol/L

（7）阴性对照：去离子水

（8）FIP引物（20μmol/L）

BIP引物（20μmol/L）

F3引物（8μmol/L）

B3引物（8μmol/L）

（9）阳性对照DNA^※2

※1：组成

Tris-HCl（PH8.8）200mM

KCl100mM

(NH₄)₂SO₄100mM

MgSO₄20mM

TritonX-1001%

※2：阳性对照DNA，是用两条外引物扩增出副溶血弧菌tlh基因后，取其片段（243bp）重组入质粒所得。

2.根据权利要求1所述一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，其特征在于LAMPPCR引物：

（1）FIP引物（20μmol/L）

GCCCATTCCCAATCGGTCG-TTTT-GTATGTTTGCGGCTGTTGGTATCG

（2）BIP引物（20μmol/L）

GTTCTACACCCAACACGTCGCA-TTTT-TCGCCAAATTCTAATGTTGCTTC

（3）F3引物（8μmol/L）ATTGTCAGCGGCGAAGAA

（4）B3引物（8μmol/L）CAGCACGCAAGAAAACCA。

3.根据权利要求1所述一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，其特征在于，检测方法的具体步骤如下：

反应体系：25μl

。

4.根据权利要求1所述一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，其特征在于PCR反应参数如下：

（1）将已配制好、分装完毕的反应试管置于恒温金属浴中，在65℃条件下反应60分钟；

（2）80℃条件下恒温10分钟或95℃条件下恒温2分钟，使酶灭活以终止反应；

结果判定：若与阳性对照一样发出黄绿色荧光，则判定为阳性；若与阴性对照一样未发出荧光，则判定为阴性。