[发明专利]一种克林霉素磷酸酯的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析化学领域，特别涉及克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析和制备方法。

背景技术

克林霉素磷酸酯属于克林霉素前药，其在体内可迅速水解为克林霉素而显示药理活性。相比于克林霉素，克林霉素磷酸酯具有抗菌活性高、吸收快、脂溶性及渗透性强、副作用少等特点。

克林霉素磷酸酯分子结构中含有磷酸酯键、硫甲基、卤素等活泼基团，易发生水解、氧化、取代、消除、重排等反应。分子中含有硫原子，易被氧化产生高价硫，或在酸性条件下磷酸酯键和硫甲基易水解。在碱性或受热时化合物容易产生卤素水解和消除反应。在上述降解过程中还会发生异构化反应。

由于克林霉素磷酸酯的稳定性低，因此对其稳定性和有关物质的充分研究对于保障药品安全至关重要。

发明内容

我们对克林霉素磷酸酯在酸破坏、碱破坏、热破坏、氧破坏以及光破坏下的的稳定性进行了研究。

母液的制备：精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为破坏性试验的母液。

a.酸破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入1ml1mol/L盐酸溶液，充分摇匀，室温下放置10h，用1ml1mol/L氢氧化钠溶液中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀。

b.碱破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入1ml1mol/L氢氧化钠溶液，充分摇匀，室温下放置10h，用1ml1mol/L盐酸溶液中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀。

c.热破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置100℃水浴中加热30min，取出，放冷至室温。

d.氧破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀。

e.光破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，5000lx照度下放置10小时，加流动相稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，并对各有关物质进行归属。

表1、破坏性试验样品的杂质与主成分含量（归一化法）及杂质归属

通过对比可以发现，样品在酸破坏、光照破坏条件下，杂质均没有明显变化；在碱破坏条件下，杂质G有所增加，有少量杂质A生成；在加热破坏条件下，有大量杂质F，杂质E生成，相对保留时间0.10，0.11，0.13，0.16，0.75处，均有少量杂质生成；在氧化破坏条件下，有大量杂质A生成，并且在相对保留时间0.33处有一个含量9.99%的未知杂质生成。

由于该氧化杂质含量较大，因此有必要对其进一步进行研究。

本发明涉及一种克拉霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法：

（1）母液的制备：精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为破坏性试验的母液；

（2）氧化：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀；

（3）分离：精密量取上述溶液20μl注入高效液相色谱仪，利用二维液相进行分析和检测：

A、一维液相色谱条件：

流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=790：210，v/v

流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=400：600，v/v

柱温30℃；

流速为每分钟1.1ml；

检测波长为210nm；

梯度洗脱条件：