[发明专利]酶联免疫试剂盒及制备和利用其进行胃蛋白酶检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床诊断技术领域，更具体地说，本发明涉及一种用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒，可进行胃蛋白酶的含量检测，并对咽喉反流性疾病进行无创诊断。

背景技术

咽喉反流性疾病是指胃内容物反流至食管上括约肌以上部位，引起一系列症状和体征的总称，临床表现为声音嘶哑或发音障碍、咽喉肿痛、咽喉部异物感、持续清嗓、慢性长期咳嗽、呼吸困难、喉痉挛等症状，以及声带后连合区域粘膜增生、肥厚，声带弥漫性充血水肿，严重时出现肉芽肿、喉室消失、声门下狭窄等喉部体征。

咽喉反流性疾病是耳鼻咽喉头颈外科一些疾病的源头病因，与慢性喉炎、声带息肉、喉接触性肉芽肿等喉部疾患关系密切。目前，咽喉反流性疾病的诊断一般依据症状和喉镜检查的反流症状指数量表以及反流体征评分量表、24小时喉咽部pH监测和胃蛋白酶试剂盒进行诊断。量表诊断缺乏特异性，准确度差；24小时喉咽部pH监测属于有创检查，不易被患者接受；目前应用的胃蛋白酶试剂盒检测唾液中胃蛋白酶诊断咽喉反流，虽然是无创检查，但其是传统的酶联免疫技术，灵敏度较差，且每天患者咽喉反流次数有限，唾液中的胃蛋白酶含量相对较低，只有在咽喉反流后一段时间内的唾液中才能监测到，漏诊率高。

化学发光免疫分析技术是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫测定技术。它将化学发光分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性相结合，与目前常用的其他免疫分析法相比具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、测量线性范围宽、稳定性好，可实现自动化、使用简便、安全、无放射性污染等诸多优点，因此倍受人们的青睐，该技术已广泛应用于传染性疾病、肥胖及相关疾病、内分泌系统、遗传病、肿瘤的早期诊断、动植物检验检疫等众多领域。

但是，目前还没有采用化学发光酶联免疫技术检测胃蛋白酶的相关技术，也没有用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒。

另外，传统的酶联反应试剂盒结构较为简单和单一，在进行试验操作过程中具有一定的不便利性。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明的另一个目的是，提供一种用于胃蛋白酶检测的化学发光酶联免疫试剂盒，能够利用化学发光酶联免疫技术对待测样品中的胃蛋白酶进行精确的定量检测。

本发明的另一个目的是，提供一种通过检测口腔或咽喉分泌物中胃蛋白酶含量进行无创诊断咽喉反流性疾病的方法。

本发明还有一个目的是，提供一种结构更为合理的试剂盒，能够提高使用便利性，并有助于提高试验检验的精确度。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，本发明提供了以下技术方案：

一种酶联免疫试剂盒，包括：

盒体；

酶标板，其包括多个微孔，所述微孔内包被有胃蛋白酶单克隆抗体，所述酶标板容置在盒体内；

试剂瓶，其容置于盒体内，所述试剂瓶内分别装有工作液、标准溶液、缓冲液、洗涤液及显色液，其中所述工作液含有酶标胃蛋白酶抗体。

优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述酶标胃蛋白酶抗体的标记物为辣根过氧化物酶，采用过碘酸钠法进行标记。

优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述标准溶液为梯度浓度的氯霉素系列标准溶液，所述标准溶液内氯霉素的浓度分别为0ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml、80ng/ml及100ng/ml；

所述显色液的化学发光底物为鲁米诺；以及

所述胃蛋白酶为人胃蛋白酶。

优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，所述盒体顶部开口，盒体的开口处设置有可抽拉的盖体；

所述盒体内还设置有带有凹槽和多个竖直孔洞的卡板；

所述酶标板水平嵌入在所述卡板的凹槽内，所述试剂瓶分别嵌入在所述卡板的孔洞内。

优选的是，所述的酶联免疫试剂盒中，

所述盖体为透明设置；

所述盖体与盒体的连接方式为：所述盒体开口的两侧设置有第一卡槽，所述盖体两侧设置有与第一卡槽相匹配的凸条，使盖体可沿所述第一卡槽滑动，以使盒体打开或合盖；

其中，所述第一卡槽的两端分别设置有1个限位块；沿所述盖体两侧凸条的外侧开设有第二卡槽，所述第二卡槽内设置有滚珠，使盖体沿所述第一卡槽滑动时所述滚珠能够沿所述第二卡槽同向自由滚动，并在滚珠抵达所述限位块位置及第二卡槽端部时停止，以使所述盖体停止滑动并得到定位；