[发明专利]用于同时检测五种牛病病毒的多重连接探针扩增检测试剂盒及引物和探针

权利要求书

1.用于同时检测蓝舌病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛地方流行性白血病病毒和口蹄疫病毒的引物和多重连接探针，其特征在于，所述多重连接探针如序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：10所示，所述引物如序列表SEQ ID NO：11至SEQ ID NO：12所示；其中，

所述序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别为检测蓝舌病病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4分别为检测牛传染性鼻气管炎病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6分别为检测牛病毒性腹泻病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8分别为检测牛地方流行性白血病病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10分别为检测口蹄疫病毒的短探针和长探针，其中，所述SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：10的5’ 端进行磷酸化处理。

2.一种检测蓝舌病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛地方流行性白血病病毒和口蹄疫病毒的多重连接探针扩增检测试剂盒，其包括：

（1）MLPA 缓冲液；

（2）探针，其包括如序列表SEQ ID NO:1至SEQ ID NO：10所示的用于检测蓝舌病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛地方流行性白血病病毒和口蹄疫病毒的多重连接探针，其中，所述SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：10的5’ 端进行磷酸化处理；

（3）连接反应液，其包括：Ligase-65 缓冲液 A和Ligase-65 缓冲液 B；

（4）Ligase-65连接酶；

（5）PCR反应液，其包括如序列表SEQ ID NO:11至SEQ ID NO：12所示的引物；

（6）SALSA 聚合酶；

（7）DEPC水；

（8）阴性对照；

（9）阳性对照；

其中，所述序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别为检测蓝舌病病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4分别为检测牛传染性鼻气管炎病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6分别为检测牛病毒性腹泻病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8分别为检测牛地方流行性白血病病毒的短探针和长探针；所述序列SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10分别为检测口蹄疫病毒的短探针和长探针。