[发明专利]一种柽柳组织培养快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及林业科学中的林木组织培养育苗技术领域，涉及一种木本植物组织培养快速繁殖方法，具体涉及一种柽柳组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

柽柳（Tamarix chinensis Lour.），又称中国柽柳，为柽柳科（Tamaricaceae）柽柳属（Tamarix L.）中典型的多年生泌盐性木本盐生植物，喜生于河流冲积平原，海滨、滩头、潮湿盐碱地和沙荒地。其枝、叶、花具有非常高的观赏价值，且具有抗旱、抗盐碱、耐水湿等特性（张胜利等，2015），适应性强，不仅是优良的防风固沙植物，同时还是水土保持树种、盐碱地改良及绿化造林树种，也是我国造林树种中大家公认的头号耐盐树种，植株可耐2.4％的盐水浇灌、在土壤含盐为25g/kg的滨海盐渍土上能够正常生长（张立宾等，2008），而且还是良好的薪炭、编制和建筑用材；嫩枝及叶药用，能解表利尿、祛风湿、治疗麻疹，其社会经济和生态效益潜力巨大、开发应用前景十分广阔。但其当前繁殖方式主要以扦插为主，繁殖规模较小、繁殖系数较低，且受季节性限制，苗木生长参差不齐；目前虽然有组织培养繁育的相关报道，但多数仅限于科学研究而未应用于生产，影响了柽柳的推广应用。

目前有少量论文及专利对柽柳组织培养相关技术环节进行了研究，其公开的柽柳及近缘种短穗柽柳（T.laxa Willd.）组织培养技术中，几乎所有文献资料（程磊等2001；李利红等2005；韦小敏等2006ab；王鹏等2007；张永才等2007；乔梦吉等2007；孙旭旭等2009）均将柽柳及近缘种组织培养繁殖技术分为无菌苗的获取、启动培养（有的将与无菌苗获取过程结合称为初代培养）、增殖（继代）培养、生根培养及移栽等五个环节。仅个别文献资料（韩琳娜等2010、刘伯燕等2015）在概念上探讨了缩短培养周期的一步成苗组织培养法，但其方法在不违背植物生长规律的情况下，无法回避无菌苗获取（初代培养）、增殖（继代）、及生根培养等环节，其缩短的培养时间有限、节约成本有限，如果大量缩短时间，苗木生长量、扩繁量必然较小，进而导致其繁殖系数低、苗木生长受限，协调各阶段状态下的苗木繁殖效率也无法达到最佳，综合效益无法最大化。省略掉增殖（继代）培养环节，会大幅降低繁殖系数。当前现有专利（刘伯燕等2015）缺少炼苗移栽环节，无法很好地指导生产。

自2001年至今，所有公开的柽柳组织培养文献资料中，除个别研究个例（孙旭旭等2009）使用1/2MS外，基础培养基均为MS培养基，各培养阶段所使用激素限于a-萘乙酸（NAA）、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、激动素（Kt），个别研究（孙旭旭等2009）中使用赤霉素（GA）、吲哚乙酸（IAA）。其中启动培养（初代培养）多使用NAA、6-BA等，增殖（继代）培养多使用6-BA、Kt等，生根培养中NAA、6-BA、Kt三种激素均有使用。生长激素有多种，且功能清楚，并具有很多的实践报道。但在柽柳组织培养技术研究的十多年中，仅仅局限在少量的激素范围内，未见有其他激素的使用，形成了固定模式下的重复性研究，没有大的创新，进而可能是导致无法突破柽柳组织培养快繁瓶颈、无法应用于生产的主要原因。其他常用激素，如吲哚丁酸（IBA）可促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进不定根的形成；玉米素（ZT）不仅能促进侧芽生长、刺激细胞分化，促进愈伤组织发芽，还能抑制过度根部形成，高浓度的玉米素还能产生不定芽分化。

所报道文献资料中，多使用升汞消毒，不仅易引起无菌苗褐化，而且易给工作人员造成健康危害、给环境造成污染。因此，十分必要研发一种使用清洁型消毒剂避免引起柽柳褐化现象、创新型组织培养配方的柽柳组织培养快速繁殖技术，促进柽柳工厂化生产、规模化推广引用。

发明内容

为了解决以上现有技术中柽柳组织培养快繁瓶颈、无法应用于生产的问题，本发明提供了一种柽柳组织培养快速繁殖的方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种柽柳组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：

（1）无菌苗获得（初代培养）

鲜嫩芽经过处理和杀菌，接于培养基中进行培养，培养基组成为MS培养基中加入6-BA 1.0～2.0mg/L、IBA 0.05～0.15 mg/L、GA 0.05～0.15 mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂7g/L，pH值调5.8～6.0，培养条件为：在25±2℃，光照12～16h，光强2000～3000lx条件下培养15～20d，获得无菌苗；

（2）继代培养