[发明专利]一种柽柳组织培养快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种柽柳组织培养快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）无菌苗获得

鲜嫩芽经过处理和杀菌，接于培养基中进行培养，培养基配方为MS培养基中加入6-BA 1.0mg/L、IBA 0.1 mg/L、GA 0.1 mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L， pH值调5.8～6.0，培养条件为：在25±2℃，光照14h，光强3000lx条件下培养18d，获得无菌苗；

（2）继代培养

在无菌条件下将获得的无菌苗接种于继代培养基上进行培养，培养基配方为MS培养基中加入ZT 0.5mg/L、IBA 0.1 mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH值调5.8～6.0，在25±2℃，光照14h，光强3000lx条件下培养20d，获得丛生芽；

（3）生根培养

在无菌条件下将丛生芽接种于生根培养基上，培养基配方为1/2MS中加入IBA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、GA 0.1mg/L、蔗糖15g/L、琼脂7g/L，pH值调5.8～6.0，在25±2℃，光照14h，光强3000lx条件下培养45d，得到生根组培苗；

（4）炼苗移栽

将生根完好的柽柳移栽到拱棚中，用遮阳网遮阳，2d后松动瓶盖但不打开瓶盖保持2d，不出现萎蔫就将瓶盖打开五分之一的缝，之后观察叶片生长情况；待瓶盖完全打开且叶片生长旺盛时，将柽柳从瓶内移出，洗去根部培养基，放在多菌灵50%可湿性粉剂5g/L溶液中浸泡45s左右，移栽到装好基质的穴盘中每天浇水使湿度达到90%，缓冲7d，适应自然温度和湿度，15d，待新根长出后移栽到大田，得到柽柳苗木。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（1）中鲜嫩芽经过处理和杀菌的步骤如下：

将鲜嫩芽放在蒸馏水里面浸泡30min，浸泡时加洗衣粉和两滴吐温，30min后用自来水冲洗1～2h，把外植体放到接种台上接种，接种前用75%酒精擦拭接种台，开紫外30min，在接种台内将柽柳外植体用无菌水冲洗3～5次，之后用75%酒精浸泡30S，然后用无菌水冲洗3次，再用2%次氯酸钠杀菌3～9min，用无菌滤纸吸干外植体表面水分。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）中基质为草炭：蛭石体积比3：1。