[发明专利]一种利用HPLC‑ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种利用HPLC-ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法。

背景技术

脂质体是指将药物包封于类脂质双分子层内形成的微型泡囊体，常用作抗肿瘤药物载体，现在已经发展成为一类成熟的新型靶向制剂。复合磷脂脂质体是由两种不同的相变温度组合成的一种脂质体，前期研究表明，不同磷脂组成脂质体的药剂学性质以及药效差异明显，与单一磷脂脂质体相比，复合磷脂脂质体具有显著的抗肿瘤活性和细胞摄取性质(彭佩，林爱华，陈军.磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体体外抗肿瘤作用[J].中成药，2014，36(2)：57-61.)。

脂质体由于稳定性差使其发展受到限制，主要原因为磷脂在储存的过程中容易发生氧化分解；而磷脂并非单一的化合物，是基架结构相同但脂肪酸链不同的一类物质的混合物，由此限制了磷脂材料的检测。在已报道的磷脂HPLC检测方法中多为紫外检测器检测，其灵敏度低；而同时检测复合磷脂脂质体这一总体物质中的大豆卵磷脂(SPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)和胆固醇的方法还未见报道。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用HPLC-ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法，该方法具有快速、高效、准确和可靠的优点，可以同时检测复合磷脂脂质体中大豆卵磷脂(SPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)和胆固醇的含量，为复合磷脂脂质体的质量监控提供可靠有力的依据。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种利用HPLC-ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法，包括如下步骤：

1)设置检测条件

HPLC条件：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为2-6mM乙酸铵缓冲溶液，流动相B为2-6mM乙酸铵甲醇溶液；

梯度洗脱：

第一阶段：采用流动相A和流动相B的混合流动相洗脱10-15分钟，其中流动相A的体积百分含量为10-15％，流动相B的体积百分含量为85-90％；

第二阶段：采用流动相B洗脱35-40分钟；

第三阶段：采用流动相A和流动相B的混合流动相洗脱5-15分钟，其中流动相A的体积百分含量为10-15％，流动相B的体积百分含量为85-90％；

流速：0.8-1.2mL·min^-1；

ELSD条件：

漂移管温度：40-50℃；氮气流速：1.7-2.1mL·min^-1；增益：4；采用分流模式；

2)绘制标准曲线

①绘制大豆卵磷脂的标准曲线

Ⅰ、称取五组大豆卵磷脂标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组大豆卵磷脂含量不同的大豆卵磷脂甲醇溶液，将五组大豆卵磷脂甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组大豆卵磷脂的峰面积；

Ⅱ、以大豆卵磷脂的峰面积的对数为纵坐标，以大豆卵磷脂含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到大豆卵磷脂的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₁x+b₁；

②绘制氢化大豆卵磷脂的标准曲线

Ⅰ、称取五组氢化大豆卵磷脂标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组氢化大豆卵磷脂含量不同的氢化大豆卵磷脂甲醇溶液，将五组氢化大豆卵磷脂甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组氢化大豆卵磷脂的峰面积；

Ⅱ、以氢化大豆卵磷脂的峰面积的对数为纵坐标，以氢化大豆卵磷脂含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到氢化大豆卵磷脂的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₂x+b₂；

③绘制胆固醇的标准曲线

Ⅰ、称取五组胆固醇标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组胆固醇含量不同的胆固醇甲醇溶液，将五组胆固醇甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组胆固醇的峰面积；

Ⅱ、以胆固醇的峰面积的对数为纵坐标，以胆固醇含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到胆固醇的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₃x+b₃；

3)实际复合磷脂脂质体样品的测定