[发明专利]一种利用HPLC‑ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法

权利要求书

1.一种利用HPLC-ELSD同时测定复合磷脂脂质体中各组分含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)设置检测条件

HPLC条件：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为2-6mM乙酸铵缓冲溶液，流动相B为2-6mM乙酸铵甲醇溶液；

梯度洗脱：

第一阶段：采用流动相A和流动相B的混合流动相洗脱10-15分钟，其中流动相A的体积百分含量为10-15％，流动相B的体积百分含量为85-90％；

第二阶段：采用流动相B洗脱35-40分钟；

第三阶段：采用流动相A和流动相B的混合流动相洗脱5-15分钟，其中流动相A的体积百分含量为10-15％，流动相B的体积百分含量为85-90％；

流速：0.8-1.2mL·min^-1；

ELSD条件：

漂移管温度：40-50℃；氮气流速：1.7-2.1mL·min^-1；增益：4；采用分流模式；

2)绘制标准曲线

①绘制大豆卵磷脂的标准曲线

Ⅰ、称取五组大豆卵磷脂标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组大豆卵磷脂含量不同的大豆卵磷脂甲醇溶液，将五组大豆卵磷脂甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组大豆卵磷脂的峰面积；

Ⅱ、以大豆卵磷脂的峰面积的对数为纵坐标，以大豆卵磷脂含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到大豆卵磷脂的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₁x+b₁；

②绘制氢化大豆卵磷脂的标准曲线

Ⅰ、称取五组氢化大豆卵磷脂标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组氢化大豆卵磷脂含量不同的氢化大豆卵磷脂甲醇溶液，将五组氢化大豆卵磷脂甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组氢化大豆卵磷脂的峰面积；

Ⅱ、以氢化大豆卵磷脂的峰面积的对数为纵坐标，以氢化大豆卵磷脂含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到氢化大豆卵磷脂的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₂x+b₂；

③绘制胆固醇的标准曲线

Ⅰ、称取五组胆固醇标准品，用甲醇分别定容稀释于容量瓶中，分别配制成五组胆固醇含量不同的胆固醇甲醇溶液，将五组胆固醇甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，得到五组胆固醇的峰面积；

Ⅱ、以胆固醇的峰面积的对数为纵坐标，以胆固醇含量的对数为横坐标，根据各组检测的数据进行绘图，拟合后得到胆固醇的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y＝k₃x+b₃；

3)实际复合磷脂脂质体样品的测定

称取复合磷脂脂质体样品，用甲醇分别定容于容量瓶中，得到复合磷脂脂质体的甲醇溶液，将复合磷脂脂质体的甲醇溶液用步骤1)的检测条件进行检测，分别得到大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂和胆固醇的峰面积，将大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、胆固醇的峰面积分别代入大豆卵磷脂标准曲线、氢化大豆卵磷脂标准曲线、胆固醇标准曲线中，分别得到大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、胆固醇的含量。