[发明专利]具有血管紧张素转化酶抑制活性的扁杏仁肽及其制备方法

权利要求书

1.具有血管紧张素转化酶抑制活性的扁杏仁肽，其特征在于该扁杏仁肽的氨基酸序列为：α-His-Thr-Asp-Asp，其中α代表Met或Gln。

2.一种权利要求1所述的具有血管紧张素转化酶抑制活性的扁杏仁肽的制备方法，其特征在于它由下述步骤组成：

(1)提取扁杏仁蛋白

将扁杏仁依次经热水脱皮、粉碎、脱脂、溶剂提取、乙醇和等电点沉降法复合沉淀、冷冻干燥，得到扁杏仁蛋白；

(2)蛋白酶解

将步骤(1)得到的扁杏仁蛋白与蒸馏水按质量体积比为40g:1L混合，在温度为42℃水浴中先用Protamex复合蛋白酶在pH值为6.5下水解100分钟，加酶量为53140U/g蛋白，水解完后在沸水浴中灭酶20分钟，然后在温度为53℃的环境中用Alcalase碱性蛋白酶在pH值为7.6下酶解90分钟，加酶量为1130U/g蛋白，酶解完后在沸水浴中灭酶20分钟，酶解过程用0.5mol/L NaOH水溶液调节pH值；10000转/分钟离心分离20分钟，所得上清液在-40℃冷冻干燥24小时，得到扁杏仁总肽；

(3)葡聚糖凝胶层析

将步骤(2)得到的扁杏仁总肽与超纯水按质量体积比为30～50g:1L混合，脱气、超滤膜过滤后加入Sephadex G-15填充柱中，以超纯水为流动相，采用自动液相色谱分离层析仪进行分离，进样量2mL，流速3mL/分钟；收集19～40分钟所有流出成分，冷冻干燥；

(4)反相制备色谱分离

将步骤(3)冷冻干燥后得到的产品与超纯水按质量体积比为40～60g:1L混合，用超滤膜过滤，超声脱气后，注射入制备色谱系统，进样量1mL，采用Sinochrom ODS-BP色谱柱分离，洗脱相A为乙腈，洗脱相B为含0.05％三氟乙酸的超纯水，梯度洗脱程序：0～10分钟，20％乙腈；10～30分钟，20％～40％乙腈；30～40分钟，40％～70％乙腈；流速12mL/分钟；收集8.52～9.14分钟和14.87～15.26分钟流出的两种成分，冷冻干燥，得到氨基酸序列为Met-His-Thr-Asp-Asp和Gln-His-Thr-Asp-Asp的扁杏仁肽。