[发明专利]诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒

说明书

本发明涉及诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒。首次揭示一种通过协同检测五种miRNAs的表达情况来诊断肝癌、特别是早期肝癌的方法，本发明还提供了用于实施所述诊断的试剂。

技术领域

本发明属于医学生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒，以及其在无症状高风险个体的群体中鉴定早期肝癌中的应用。

背景技术

肝细胞性肝癌(HCC)是世界范围内最常见的实体恶性肿瘤之一，占世界范围内癌症相关死亡的第二位。由于缺乏有效的早期诊断或对肝癌潜在高危人群的临床前筛查方法，因此利用现有的肝癌诊断方法确诊的病人仅有1/3适合手术切除。而这些患者的5年生存率也非常不理想，整体不高于14％；而肝癌早期患者的5年存活率则可提高近一倍，约为27％。所以有力的、可信的，特别是针对无症状高风险人群的肝癌极早期诊断工具将有效提高肝癌患者的生存率。

目前使用得最广泛的肝癌筛检方法包括血清甲胎蛋白(AFP)检测和B超等影像学检查等。AFP是目前全世界应用最广泛的肝癌肿瘤标志物，已经应用了数十年。然而，这种单一的标志物灵敏度低，且经常出现假阳性结果，例如在大量的肝硬化患者中，AFP也会升高。此外，血清AFP仅能检测出60％的肝癌患者。如此的敏感性、特异性目前均不令人满意。而虽然改进的成像技术使人们有可能发现肝脏局灶性小病变，但是还很难区分良性病变与肿瘤，并且检测通量低，需要昂贵的检测设备，不适合于多中心大样本的临床筛查。

因此，各国学者们从来没有停止过寻找新的更好的肝癌标志物的脚步。理想的肿瘤标志物需要有较高的特异性，能够将肝癌与肝硬化、肝炎、肝脏再生结节等区别开来；同时还需较高的敏感性，能够在肝癌早期提示诊断，且有易检测、可重复、侵入少的特点。

miRNAs是一种内源性的、长约22nt的RNA，它通过靶向mRNA导致其降解或翻译抑制而在动、植物中起到重要的调节作用。miRNAs广泛存在于灵长类、啮齿类、鸟类、鱼类、蝇类、蠕虫类、植物、病毒中，从2002年有统计的200多种到2008年底的将近9000种，miRNAs的发现呈现爆发性增长，并且不断有新物种中的miRNAs被发现。人类miRNAs基因仅约占基因总数的2％-3％，但却能调控人体内1/3的蛋白表达，这种转录后调控作用直接影响了这些靶基因的功能，参与了包括消化系统在内的多个系统的生理、病理过程。miRNAs在消化系统中的作用涉及发育、老化、分泌、代谢、病毒感染、免疫反应、肿瘤等等方面。

因此，鉴于miRNAs参与了人体内大量的调控，找到与肿瘤的发生发展有关的miRNAs，可以为肿瘤的诊断或治疗提供新的有效途径。

发明内容

本发明的目的在于提供诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种用于检测肝癌的试剂盒，所述的试剂盒中包括：

特异性检测人hsa-miR-193a-3p的检测试剂；

特异性检测人hsa-miR-369-5p的检测试剂；

特异性检测人hsa-miR-672的检测试剂；

特异性检测人hsa-miR-429的检测试剂；和

特异性检测人let-7i*的检测试剂。

在一个优选例中，所述的试剂盒中，所述的检测试剂是RNA逆转录引物、DNA扩增引物和DNA探针。

在另一优选例中，所述的试剂盒中，特异性检测人hsa-miR-193a-3p的检测试剂是SEQ ID NO:6所示的逆转录引物、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的扩增引物，SEQ ID NO:9所示的探针；