[发明专利]产能检测磺胺药物的蛋白质的重组大肠杆菌及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域中产能检测磺胺药物的蛋白质的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。

背景技术

食品中残留的兽药会破坏胃肠道菌群平衡，并可导致长期的腹泻、维生素缺乏及影响其它药物的疗效，从而影响人体健康。磺胺药物是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的化学药物，磺胺药物价格便宜、使用方便，广泛应用于动物疾病防治和促生长，其在动物源食品中的残留问题已经引起人们的广泛关注。如何确保动物源食品质量安全，除了严格控制产业链中磺胺药物的使用外，建立动物源食品中磺胺药物的快速检测方法则显得尤为重要。

目前磺胺药物的检测方法主要有仪器法(包括高效气相色谱、高效液相色谱以及色质联用技术等)、微生物法、免疫分析方法以及受体分析方法等。这些方法各有特点：仪器法准确、可靠、灵敏度高，是一种确证方法，但是不适合现场快速检测；微生物法可同时检测多种抗生素，但灵敏度不高、检测时间长，且无法定量；免疫分析方法基于抗原抗体的特异结合，具有灵敏度高、特异性强、可定量检测等优势，但由于灵敏度高且可识别同一类药物的抗体难以获得，制约了其在兽药残留检测领域的应用。欧盟制定了磺胺药物总量在动物源食品中的最高残留限量为100ng/mL。如能获得可同时检测多种磺胺药物的物质将有助于磺胺药物的检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测多种磺胺药物。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一株能高效产生可用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的重组大肠杆菌。

本发明所提供的一株能高效产生可用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的重组大肠杆菌是大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21(DE3)-pET28b-flop，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.10068。该菌种已于2014年11月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。

为解决上述技术问题，本发明还提供了构建重组大肠杆菌的方法。

本发明所提供的构建重组大肠杆菌的方法，包括将用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的编码基因导入受体大肠杆菌中得到产所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的重组大肠杆菌；

所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop为如下a)或b)的蛋白质：

a)由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将SEQ ID No.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop活性的由a)衍生的蛋白质。

其中，SEQ ID No.1由314个氨基酸残基组成。

上述构建重组大肠杆菌的方法中，所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的编码基因为如下1)或2)或3)的核酸分子：

1)其编码序列是SEQ ID No.2的DNA分子或cDNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的DNA分子或cDNA分子；

3)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的DNA分子或cDNA分子。

其中，SEQ ID No.2由945个核苷酸组成，其编码序列是第1-945位。

这里使用的术语“同一性”指核酸序列间的序列相似性。“同一性”包括与本发明的SEQ ID No.2所示的DNA分子或cDNA分子具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

上述构建重组大肠杆菌的方法中，所述用于检测多种磺胺药物的蛋白质flop的编码基因通过重组表达载体导入所述受体大肠杆菌中。