[发明专利]一种溯源鉴定8种动物源性成分的PCR方法

权利要求书

1.一种溯源鉴定8种动物源性成分的PCR方法，其特征在于，所述的方法是用PCR扩增反应鉴定山羊、绵羊、水牛、家牛、猪、鹿、骆驼和牦牛源性成分；包括如下的步骤：

1)提取待检测样品的基因组DNA，将提取的样品基因组DNA溶于TE溶液中或纯水中保存备用；

2)利用PCR引物对检测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，所用引物序列如下：

上通用上游引物:CCTCCCTAAGACTCAGGGAA(SEQ ID NO:1)、

下游引物优选:CGGAGCGAGAAGAGG(SEQ ID NO:3)、

3)对PCR产物进行电泳检测，依据PCR产物条带大小和有无可判定检测样品中是否含有上述8种动物源性成分，其中山羊、绵羊、水牛、家牛、猪、鹿、骆驼、牦牛扩增后获得对应片段大小分别为787bp、763bp、563bp、512bp、507bp、491bp、455bp和385bp。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)的PCR产物，用SspI酶切进一步鉴定，其酶切后对应产物片段大小为：山羊：317bp、192bp、160bp和118bp；绵羊：301bp、237bp、78bp和75bp；鹿：417bp和146bp；水牛：512bp；家牛：329bp和178bp；牦牛：240bp、178bp和73bp；猪：300bp和155bp；骆驼：385bp。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)的PCR反应程序如下：

95℃变性5min；95℃变性30s，退火61.5℃35s，72℃延伸30s为一个循环，共计30个循环；然后72℃保持10min；结束后降温至4℃。

4.一种适用山羊、绵羊、水牛、家牛、猪、鹿、骆驼和牦牛成分检测的PCR试剂盒，其包含下列试剂及合适浓度：

PCR A液：含有0.2mM的dNTP混合物，2.0mM的MgCl₂，1xPCR buffer，1U/20μL的Taq聚合酶，各1.0mM的上下游引物和双蒸水；

所述的上下游引物为权利要求1的方法中使用的引物；

PCR B液：含有阳性猪DNA模板，浓度为50ng/μL。