[发明专利]一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂，其特征在于它是由木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶成分组成，其各酶种的活力如下:

木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；

果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；

α-淀粉酶3000IU/g。

2.权利要求1所述用于提取植物有效成分的复合酶制剂的生产方法,其特征在于它是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成，其各菌粉的重量份数如下:

地衣芽孢杆菌3-4份；枯草芽孢杆菌1-2份；

黑曲霉2-3份；绿色木霉2-3份；

其中各组分的活菌含量分别为：

复合发酵剂活力总数≥10⁸cfu/g。

3.权利要求2所述的生产方法,其特征在于按如下的步骤进行：斜面菌种→液体种子培养→种子罐发酵→发酵罐发酵→离心分离菌体细胞→陶瓷膜超滤浓缩酶液→添加膨化植物蛋白载体→低温喷雾干燥→过筛→固体复合酶产品。

4.权利要求2-3所述的生产方法,其特征在于按如下的步骤进行：

斜面菌种培养：

地衣芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，酵母膏5，NaCl5，琼脂30，自来水配制，pH7.5，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；

枯草芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，琼脂20，pH值为7.2，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；

黑曲霉菌种使用斜面培养基（g/L）：土豆200，葡萄糖20，磷酸氢二钾3，七水硫酸镁1.5，pH自然，在28～30℃条件下静止培养20～48小时；

绿色木霉使用斜面培养基（g/L）：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)7.5，蛋白胨5.0，吐温-802.0mL，MgSO₄·7H₂O0.3，CaCl₂0.3，FeSO₄·7H₂O5.0mg，MnSO₄·H₂O1.6mg，ZnSO₄·7H₂O1.4mg，CoCl₂·6H₂O2.0mg，自然pH，在28～30℃条件下静止培养48～72小时；

液体种子培养：

地衣芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：魔芋粉30，骨胨30，玉米浆5，（NH₄）₂SO₄5，Na₂HPO₄4，KH₂PO₄0.3，MgCl₂0.6，CaCl₂3，FeSO₄0.01，Na₂CO₃3，pH7.0，温度30℃，转速250～360r/min，培养48～72h；枯草芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，氯化钠5，pH值为7.2，温度30℃，转速140r/min，培养24h；

黑曲霉摇瓶放大培养基（g/L）：半纤维素15～20，NH₄NO₃2～4，酵母粉2～4，KCL0.4～0.6，K₂HPO₄0.5～1.5，FeSO₄0.01～0.03，MgSO₄·7H₂O0.3～0.6，CoCL₂0.01～0.03，吐温0.5～1.5，pH5.5；

温度28～30℃，转速180～250转/分钟，培养48～60h；

绿色木霉摇瓶放大培养基（g/L）：蛋白胨11.0，硫酸铵13，葡萄糖6，KH₂PO₄10.5，稻草粉13.4，CaCl₂0.8，MgSO₄·7H₂O0.6，FeSO₄·7H₂O5，ZnSO₄·7H₂O1.4mg，CoCl₂·6H₂O3.7mg，MnSO₄·H₂O1.6mg，吐温-800.3mL，接种斜面培养的孢子，28℃，150r/min，振荡培养72h；

种子罐发酵：

种子罐发酵培养基（g/L）：黄豆饼粉10.1、玉米淀粉16.9、蛋白胨1.1、葡萄糖2.4、硫酸铵8.0、硫酸镁0.45、磷酸氢二钾0.45、氯化钠4.50,自然pH；

发酵罐内温度28～30℃，通风量9～13m³/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa，地衣芽孢杆菌接种量10%、枯草芽孢杆菌接种量3%、黑曲霉接种量6%、绿色木霉接种量6%，发酵48h；

(4)发酵罐发酵：

种子罐发酵培养基（g/L）：骨胨30，玉米浆5，（NH₄）₂SO₄5，g，稻草粉13.4g，Na₂HPO₄4，H₂PO₄0.3，MgCl₂0.6，CaCl₂3，FeSO₄0.01，Na₂CO₃3，吐温-800.3mL，pH7.0，消泡油4，自来水配制；

发酵罐内温度28～30℃，通风量8～10m³/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa搅拌速率270r/min，接种量10%，发酵68～72h；

离心分离菌体细胞：发酵液经管式离心机分离，收集滤液于储罐；陶瓷膜超滤浓缩酶液:将储罐中滤液进行超滤膜浓缩，超滤压力小于0.1Mpa，浓缩时间3小时/6吨滤液；

添加载体：

向浓缩酶液中加入膨化大豆颗粒作为载体，使其在浓缩酶液中的终浓度达到10%，并于匀浆中充分搅拌混匀；

低温喷雾干燥:

将已加入载体的浓缩酶液经过高速气流浓缩低温喷雾干燥机进行喷雾干燥制成固体复合酶产品。

5.权利要求1所述的用于提取植物有效成分的复合酶制剂在制备提高人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙有效功能性成分提取率方面的应用。