[发明专利]玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的特异SSR标记及其应用

权利要求书

1.一种玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的特异SSR标记，其特征在于,该标记PC9的引物正反引物序列如下：

正向引物5′-3′：ATTCCTCCAAACGAGCCCTA，

反向引物5′-3′：CTGGTAAATGACGATTCCGC。

2.权利要求1所述玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的特异SSR标记的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是指玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的特异SSR标记在转玉米PEPC基因水稻育种中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取水稻、玉米基因组DNA和/或RNA或cDNA；

2)使用所述权利要求1所述基因标记PC9的引物正反引物序列PCR扩增转玉米PEPC基因水稻、玉米基因组DNA和/或RNA或cDNA；

3)电泳检测扩增产物，如果出现131bp的单条带，则表示水稻品种中含纯合的玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因；如果出现340bp的单条带，则表示水稻品种中不含有玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因；如果同时出现131bp和340bp两个条带，则表示水稻品种为玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因杂合体。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其中，步骤2)中PCR扩增具体操作为：

PCR扩增采用20μL反应体系：模板DNA或RNA或cDNA1.0μL，10×PCRBuffer（1.5mMMg²⁺）2.0μL，2mM的dNTP2.0μL，0.2μM的引物2.0μL，Taq酶1U，加ddH₂O补至20μL；

PCR扩增程序为：(1)94℃预变性5min；(2)94℃变性30s，53.6℃退火30s，72℃延伸30s，扩增35个循环；(3)72℃延伸10min，4℃保温。