[发明专利]一种基于稀有细胞检测HER-2/CEP17基因状态的方法及相关试剂盒

权利要求书

1.一种基于稀有细胞检测HER-2/CEP17基因状态的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，从患者获得血液样本或其他含有稀有细胞的体液样本，样本中包含CTC或其他稀有细胞与白细胞的混合细胞群；

步骤2，用缓冲液稀释样本，离心去除血浆，并回收CTC或其他稀有细胞；

步骤3，用红细胞裂解液裂解，离心去除红细胞并回收CTC或其他稀有细胞；

步骤4，用包被有抗人白细胞相关抗原抗体的磁微粒同步骤3所得的回收细胞混匀孵育，以使磁微粒同标的白细胞充分结合并形成磁微粒-白细胞混合体；

步骤5，离心将磁微粒-白细胞混合体与其他细胞分离，得到含有CTC或其他稀有细胞及少量白细胞的混合细胞群；

步骤6，使用免疫荧光细胞化学与荧光原位杂交的相结合的方法，测定HER-2/CEP17的状态，同时进行CTC或其他稀有细胞的鉴别。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述缓冲液为与血液密度相近、包含BSA及PBS、PH7-8的缓冲液，其中，步骤3所述红细胞裂解液为任意一种红细胞裂解液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4所述包被有抗人白细胞相关抗原抗体的磁微粒为一种包被抗白细胞共同抗原抗体的链亲和素磁珠，能够牢固地结合白细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5所述离心介质为一种密度介于1.070-1.080之间的密度梯度离心液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6所述使用免疫荧光细胞化学与荧光原位杂交的方法，测定HER-2/CEP17，对CTC或其他稀有细胞进行鉴别，方法如下：

(1)HER-2扩增型CTC：将标本置于荧光显微镜相应通道下观察，若发现多个HER-2信号点分布(≥3个)，且数目大于CEP17的信号点数，并且无CD45抗原表达，则计为一个CTC阳性细胞，且直接视该细胞为HER-2阳性细胞；

(2)染色体扩增型CTC：计数单个有核细胞CEP17信号数目，若大于等于3个信号点且无CD45抗原表达，则计为一个CTC阳性细胞；

(3)HER-2/CEP17-CTC总数目：记录所有HER-2扩增型及染色体扩增型CTC数目，总和视为HER-2/CEP17-CTC总数目；

(4)HER-2基因扩增状态记录：在所有标本区域中若有明显且典型HER-2扩增，则记为HER-2扩增；若无，则将所有CTC细胞内平均每个细胞核中HER-2信号数量、平均每个细胞核中CEP17信号数量、平均每个细胞核中HER-2和CEP17信号数量比值的结果。

6.一种用于权利要求1方法的试剂盒，其特征在于，包括如下成分：

CS1浓缩缓冲液(10×)

CS2浓缩储存液(10×)

CS3分离介质

磁微粒混悬液

CF1固定液

10×CF2固定液

DAPI染色液

HER-2/CEP17探针

CD45-AF594荧光抗体

甲酰胺工作液

20×SSC浓缩缓冲液

BSA。