[发明专利]一种超滤处理黄霉素发酵液的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，涉及一种超滤处理黄霉素发酵液的方法。

背景技术

黄霉素，又名默诺霉素(moenomycin)，是一种磷酸糖脂类抗生素，为斑伯氏链霉菌的发酵产物，是一些结构类似物的通用名称。黄霉素对革兰氏阳性菌作用较强，其药理作用在于干扰肽聚糖的生物合成，导致细菌细胞破裂而引起细菌自溶。长期以来，黄霉素主要作为抗生素类畜禽生长促进剂在世界各国使用。中国专利CN1194984A公开了黄霉素的新用途，黄霉素及其铋盐组合物可以控制幽门螺杆菌的感染，治疗胃溃疡等各种胃病。为了减少药物的副作用，人用药物其药用组分一般为单一的化合物，因此黄霉素A组分的分离纯化研究价值凸显。

英国专利GB1068639与中国专利ZL 200510051382.1通过对溶剂萃取、透析、沉淀、硅酸镁柱层析脱色、凝胶过滤柱层析、阴离子交换色谱、反相色谱等分离纯化方法的不同组合，去除了其它杂质，得到了黄霉素各组分的混合物。

有关单一黄霉素A组分的分离纯化文献如下所述：

美国专利US 3660569在对料液前处理的基础上，通过硅胶正相色谱得到黄霉素A组分。

孙承航等人(磷酸糖脂类抗生素moenomycin A的分离和鉴定,中国抗生素杂志，2003,28(6):325-327,360)先以美国专利US 3660569公开的正相色谱预分离黄霉素，再通过分析级反相色谱柱，得到了黄霉素A组分纯品。

中国专利ZL 201210029457.6公开了一种制备黄霉素A组分的方法。通过C18固相萃取→C18分析柱分离→C18固相萃取进一步精制，为了保证纯度，所用试剂均为色谱纯及超纯水，最后得到淡黄色的Mon A。

美国专利US 5986089所公开的黄霉素A组分的制备工艺其核心工艺为大孔吸附或超滤与溶剂萃取组合→阴离子交换色谱→反相色谱。

综上所述，由于黄霉素各组分之间结构的类似性，为了得到单一的黄霉素A组分，上述专利均以不同模式的色谱分离为核心。为了达到色谱分离的目的，同时也为了保护昂贵的色谱填料，在色谱分离前都有多步预处理工艺，工艺冗长繁琐，成本极高。

德国Hoechst公司申报了一系列关于黄霉素分离纯化的专利，如英国专利GB 1068639、美国专利US 3660569、US 3674866等都提及黄霉素具有不可透析的特性，也就是说黄霉素作为一种分子量68000-70000的大分子化合物，不能透过常规的膜孔。并以此特性为基础分离、纯化黄霉素。如英国专利GB 1068639提出透析法分离黄霉素有特别的优势，并在实施实例中将溶剂萃取后的黄霉素连续透析3天。作为透析原理的现代工业应用，美国专利US 5986089也在实施例中详解了超滤法分离纯化黄霉素的过程，但以实施例中的数据来分析，超滤法的实际效果逊于大孔吸附法。

后来的研究表明黄霉素各组分的分子量远远小于早期的认识，真实的分子量小于1600。黄霉素之所以不能透析以及早期对其分子量的错误认识在于黄霉素独特的化学结构。黄霉素为两性化合物，其一端为疏水性极强的C25脂肪链，另一端含有5个亲水性极强的单糖，以及可电离的3个酸性位点，因此其物理化学性质与离子型表面活性剂类似。在水溶液中黄霉素分子相互聚集，以胶束的形式存在，因而表现出大分子的特征，比如难以透析。也正是基于此特性，英国专利GB 1068639、美国专利US 5986089通过膜分离的方式分离黄霉素，即小分子杂质透过膜孔，而将黄霉素以大分子胶束的形式滞留在膜的另一侧。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，该方法操作流程简单，节能环保，

本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明公开了一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，包括以下步骤：

1)将黄霉素发酵液用去离子水连续超滤1h，弃去透析液；

2)将步骤1)超滤截留的黄霉素发酵液用含有胶束调节剂的水溶液继续超滤1h，收集富集黄霉素的透析液。

步骤2)所述的胶束调节剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、甲酰胺或尿素。

超滤所用超滤膜的材质为聚醚砜、聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

超滤所用超滤膜的截留分子量为3000～50000。

在步骤1)前还包括对黄霉素发酵液进行预处理，具体操作为：将黄霉素发酵液于4℃冷藏过夜，然后在8000r/min的条件下离心10min。

在步骤2)后还包括对富集黄霉素的透析液采用色谱法进行精制的步骤。