[发明专利]一种定量检测B型钠尿肽的试剂盒及B型钠尿肽的检测方法有效
| 申请号： | 201510429265.8 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN105021829B | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 邢志祺;齐颖颖 | 申请（专利权）人： | 河北特温特生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司13100 | 代理人： | 董金国,李志民 |
| 地址： | 050000 河北省石家*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定量 检测 型钠尿肽 试剂盒 方法 | ||
1.一种定量检测B型钠尿肽的试剂盒，其特征在于，其包括免疫磁珠和双抗体夹心荧光免疫ELISA试剂盒；所述免疫磁珠为抗B型钠尿肽的多克隆抗体通过链霉亲和素-生物素偶联纳米磁微粒制备；所述多克隆抗体由B型钠尿肽多肽段aar6-18，aar10-22和aar11-26混合免疫兔子得到的混合物；
所述双抗体夹心荧光免疫ELISA试剂盒的一抗和二抗通过多肽合成的B型钠尿肽偶联KLH作为抗原免疫BALB/c雌性6周龄健康小鼠，按常规的杂交瘤技术和极限稀释法制备和筛选得到；
所述一抗亚型为IgG1，二抗亚型为IgG2a，所述二抗用碱性磷酸酶标记。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫磁珠的制备方法为：将B型钠尿肽偶联KLH作为抗原免疫新西兰大白兔，所得抗B型钠尿肽血清经硫酸铵沉淀法进行纯化，待用；洗涤磁珠，依次加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺和二氯乙烷，置于混匀仪上保持磁珠悬浮状态，37℃活化2h；将活化后的磁珠与链霉亲和素偶联，获得的链霉亲和素磁珠，再将其与待用的抗B性钠尿肽血清置于混匀仪上偶联，形成免疫磁珠。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述一抗为2C10，一抗的包被缓冲液为0.01M PBS，pH7.2，包被浓度为2.5μg/mL。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗与碱性磷酸酶的摩尔比为4：1。
5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述二抗的浓度为1.65μg/mL或1.8μg/mL。
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