[发明专利]白芍品种检测方法

说明书

本发明涉及一种白芍品种检测方法，属于植物品种鉴别技术领域。该方法包括以下步骤：建立鉴别模型：取不同品种的白芍，分别提取其DNA，然后将所提取到的DNA用引物进行聚合酶链式反应扩增，得到扩增产物，并对该扩增产物进行电泳分离，得到不同品种白芍的DNA电泳图，以该电泳图的谱图信息建立白芍品种鉴别模型；品种鉴别：取待测白芍，按照上述方法得到其DNA电泳图，将该待测白芍电泳图的谱图信息代入上述鉴别模型中进行分析，判定得到该白芍的品种。该方法为白芍品种的区分提供了有效可靠的鉴定手段。相对于传统形态鉴定具有巨大优势，在白芍药材的研究和应用中，为解决品种混乱和品种优劣问题提供了一种新的手段。

技术领域

本发明涉及一种植物品种鉴别方法，特别是涉及一种白芍品种检测方法。

背景技术

ISSR(inter-simple sequence repeat)是Zietkeiwitcz等于1994年发展起来的一种微卫星基础上的分子标记技术。其基本原理是用锚定的微卫星DNA为引物，即在SSR序列的3'端或5'端加上2-4个随机核苷酸，在PCR反应中，锚定引物可引起特定位点退火，导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增。所扩增的inter SSR区域的多个条带通过聚丙烯酰胺凝胶电泳得以分辨，而扩增谱带多为显性表现。

根据现代分子生物学研究表明，中药材(不含矿物药)的生物种质资源多样性是由于其基因多态性导致的结果，而基因多态性可在DNA分子标记技术水平进行检测，这是比在形态、组织和细胞水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。ISSR揭示的多态性较高，可获得几倍于RAPD(Random Amplification Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)的信息量，精确度几乎可与RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性)相媲美。

白芍(Radix Paeoniae),别名芍药，多年生草本，为毛茛科(Ranunculaceae)植物芍药(Paeonia lactifloraPall)的去皮干燥根，性微苦，味苦酸。其主要成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧芍药苷、苯甲酰芍药苷，通称芍药总苷。具有抗炎、抗病毒、解痉镇痛、护肝等多种药理活性。白芍在我国栽培已有3900多年的历史，由于其药理活性强，临床应用广泛，白芍长期以来就被作为多种中药和新药的主要原料。由于大部分栽培白芍药材仅经过短期引种和驯化，在传统的白芍道地药材中可能存在着一些经过多年选择但未完全纯化的地方优良品种。我国的白芍历来有三大传统品种，即产区为安徽亳州的亳白芍、浙江东阳等地的杭白芍以及四川中江等地的川白芍。另外在山东、陕西和江苏等地也有白芍产出。道地白芍疗效好，品质佳，成为商品白芍的最佳选择。

近年来随着中药市场的快速发展，新的白芍种植基地不断出现。白芍历来以亳、杭、川为道地，据胡世林等的研究报道，单以芍药苷含量而论，亳芍、川芍要优于杭芍，同时他发现山东曹县产的白芍尽管没有名气，但其外观与以上道地产品类似，芍药苷含量高达1.95％，提示该处可能成为新兴的道地产区。白芍药材来源除了部分来自种植基地外，大量原药材仍来自散户的收购。因此，生产条件的不规范导致白芍药材质量参差不齐；同时由于长期的分散种植，目前白芍种质遗传结构、来源不是很清楚，有的来自原产地，有的来自不同时期的引种品，有的是同地不同种，因此原植物遗传结构有较大程度的变异，品种间可能存在相当的混杂度。有必要从源头及白芍种质资源、种植规范方面严格要求，搞清白芍药材的道地性，建立品种质量标准，指导GAP(Good Agriculturing Practice，中药材生产质量管理规范)标准化生产。

而对道地药材种源的遗传分析、品种科学鉴定和标记是解决白芍种植的品种混乱问题和检验原材料市场上存在的品质优劣的基础，是保证道地白芍药材道地性的关键。道地性白芍和非道地性白芍外观形态、质地纹理都非常相似，运用传统方法很难准确区分道地性白芍和非道地性白芍。

发明内容