[发明专利]白芍品种检测方法

权利要求书

1.一种白芍品种检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

建立鉴别模型：取不同品种的白芍，分别提取其DNA，然后将所提取到的DNA用引物进行聚合酶链式反应扩增，得到扩增产物，并对该扩增产物进行电泳分离，得到不同品种白芍的DNA电泳图，以该电泳图的谱图信息建立白芍品种鉴别模型；

品种鉴别：取待测白芍，按照上述方法得到其DNA电泳图，将该待测白芍电泳图的谱图信息代入上述鉴别模型中进行分析，判定得到该白芍的品种；

所述引物由引物1-引物13组成：

引物1：AGAGAGAGAGAGAGAGT；

引物2：AGAGAGAGAGAGAGAGC；

引物3：AGAGAGAGAGAGAGAGG；

引物4：GAGAGAGAGAGAGAGAC；

引物5：CACACACACACACACAA；

引物6：CACACACACACACACAG；

引物7：ACACACACACACACACT；

引物8：ACACACACACACACACC；

引物9：AGAGAGAGAGAGAGAGYT；

引物10：AGAGAGAGAGAGAGAGYA；

引物11：GAGAGAGAGAGAGAGAYT；

引物12：GAGAGAGAGAGAGAGAYG；

引物13：CACACACACACACACARC；

其中：R为A或T，Y为C或G；

所述谱图信息通过以下方法得到：对电泳图上重复性好且条带清晰的电泳条带计数，有条带记为1，无条带记为0，得到0、1矩阵数据，该矩阵数据即为谱图信息；

根据所述谱图信息，算出各品种的白芍之间的相似系数，并进行聚类分析，得到不同品种白芍的鉴别模型。

2.根据权利要求1所述的白芍品种检测方法，其特征在于，所述聚合酶链式反应扩增的反应体系为：DNA模板的浓度为30～80ng/25μL，DNA聚合酶的浓度为1.0～2.0U/25μL，镁离子的浓度为1.5～2.5mmol/L，dNTPs的浓度为180～270μmol/L，每种引物的浓度均为0.2～0.5μmol/L。

3.根据权利要求2所述的白芍品种检测方法，其特征在于，所述聚合酶链式反应扩增的反应程序为：首先93～98℃变性3-5分钟，93～98℃变性40-50秒，51～58℃退火40-50秒，然后70～75℃延伸80-100秒，30-40个循环；最后70～75℃延伸8-12分钟。

4.根据权利要求1所述的白芍品种检测方法，其特征在于，提取白芍DNA的方法如下：将白芍置于预冷的研钵中，加入液氮研磨成细粉，迅速转移至离心管中；加入60-70℃预热的十六烷基三甲基溴化铵缓冲液，60-70℃水浴20-60分钟；冷却至室温，加入体积比为20-28:1的氯仿：异戊醇混合溶液混匀，10000-14000rpm离心10-20分钟，取上清液，加入NaAc和无水乙醇，混匀后10000-14000rpm离心3-7min，弃上清，得到DNA沉淀；再加入60-80％的乙醇溶液洗涤DNA沉淀，并将该DNA沉淀于室温晾干，即得。

5.根据权利要求1所述的白芍品种检测方法，其特征在于，所述电泳分离的条件为：用琼脂糖凝胶电泳法进行电泳，电泳电压为120～180V，电泳时间为0.5h～1h。