[发明专利]一种猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗兔体效力检验方法在审
| 申请号： | 201510416570.3 | 申请日： | 2015-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN104940957A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 张恒;张小苗;范根成;杜元钊;孙永科;孙成友;申洪银;胡潇;郭玉广;陶晓珊;王龙 | 申请（专利权）人： | 青岛易邦生物工程有限公司 |
| 主分类号： | A61K49/00 | 分类号： | A61K49/00;C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/00 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266114 山东省青岛市红岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 猪瘟 病毒 基因 重组 载体 疫苗 效力 检验 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗兔体效力检验的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
1)冻干疫苗按照不同的稀释梯度免疫兔体后第14天，用猪瘟脾淋毒接种兔的耳缘静脉攻毒，于攻毒后连续3天每6h检测兔体反应热；
2)攻毒后第3天剖杀兔，称兔体重和脾脏重量，计算兔脾脏/体重指数比；
3)将兔脾脏放于10％福尔马林固定、做组织切片，显微镜观察兔脾病理学变化；
4)将兔脾称取1g提取脾脏总RNA,采用RT-PCR方法检测猪瘟脾淋毒的存留情况；
5)将兔脾组织低温下研磨，通过0.22um滤膜过虑除菌，滤液接种ST细胞，盲传3代后，进行IFA鉴定是否有猪瘟脾淋毒感染细胞；
6)判定方法：当兔体温均＜40.5℃、兔脾脏/体重指数比mean≤0.055％、兔脾组织显微观察未出现充淤血、RT-PCR均检测不到猪瘟脾淋毒基因存留和IFA病毒分离均为阴性同时成立时，判为该疫苗保护兔体免受猪瘟脾淋毒的攻击；当其中任何一项检测均不在此范围内时，判为该疫苗未能保护兔免受猪瘟脾淋毒的攻击。
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