[发明专利]新型shRNA表达载体及其制备和应用

权利要求书

1.一种核酶增强型shRNA，所述核酶增强型shRNA的核苷酸序列从5′端到3′端依次具有以下区域：

(a)5′端配对区域，所述5′端配对区域长度大于或等于19nt；

(b)顶端环区域，所述顶端环区域长度大于或等于2nt；

(c)3′端配对区域，所述3′端配对区域长度大于或等于19nt，并且所述5′端配对区域与3′端配对区域形成双链区域，所述双链区域长度大于或等于19bp；

(d)3′端未配对区域，所述3′端未配对区域长度为0-6nt；

(e)与3′端未配对区域相连的核酶区，所述核酶区编码具有自切割功能的核酶，

其中，所述核酶增强型shRNA产生siRNA，且所述siRNA的核苷酸序列对应于所述3′端配对区域或5′端配对区域。

2.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA，其特征在于，所述核酶增强型shRNA中顶端环长度为2-10nt。

3.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA，其特征在于，所述3′端未配对区域长度为1-6nt。

4.如权利要求1-3中任一项所述的核酶增强型shRNA，其特征在于，所述核酶选自下组：HDV核酶、发夹状核酶、锤头状核酶。

5.一种表达盒，所述表达盒包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA的编码序列以及与所述编码序列操作性相连的启动子和终止信号。

6.一种构建物，所述构建物包含权利要求5所述的表达盒。

7.一种细胞，所述细胞包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物。

8.一种产生siRNA的方法，所述方法包括：

1)将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞；和

2)培养所述哺乳动物细胞，从而在所述哺乳动物细胞中产生siRNA。

9.一种在哺乳动物细胞中实施RNAi的方法，所述方法包括：

将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞。

10.一种组合或组合物，所述组合或组合物包含：

1)权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物；和

2)适合将1)所述的核酶增强型shRNA或表达盒或构建物导入哺乳动物细胞的其它试剂；

所述组合或组合物在导入哺乳动物细胞后产生siRNA或实施RNAi。