[发明专利]一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂及其有效制备方法

权利要求书

1.一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从人外周血中分离单个核细胞；

（2）将单个核细胞接种到无血清培养基中，加入IFNγ、GM-CSF、IL-4，培养1天；

（3）加入IL-2、IL-15、抗CD3单抗培养2天；

（4）加入TNFα，继续培养1天促进DC细胞的成熟；

（5）加入IL-2和IL-15继续培养8天，即得DC-CIK细胞；

（6）离心收集（1～5）×10⁹细胞，用0.9%生理盐水洗涤2次，离心后弃上清，将细胞移至100ml输液瓶中，并添加5ml 20%人血清白蛋白和100ml 0.9%的生理盐水，制作成细胞悬液即得DC-CIK细胞制剂。

2. 如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的单个核细胞是采用人淋巴细胞分离液密度梯度离心的方法制备。

3.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的单个核细胞的细胞浓度调整为2x10⁶/m1。

4.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的无血清培养基由AIM-V、LonzaX-VIVO15和RPMI 1640培养基以1:1:1的比例配制而成。

5.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的IFNγ的浓度为500～1000U/m1、GM-CSF的浓度为800U/m1、IL-4的浓度为500～1000U/m1。

6.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的IL-2的浓度为100～500U/m1、IL-15的浓度为10～20ng/m1、抗CD3单抗的浓度为10～50ng/m1。

7.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的TNFα的浓度为500～1000U/ml。

8.如权利要求1所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的有效制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中的IL-2的浓度为500～1000U/m1、IL-15的浓度为10～20ng/m1。

9.权利要求1-8中任一项的制备方法制备得到的人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂。

10.如权利要求9所述的一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂，其特征在于，所述的人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂的CD₃+CD₅₆+细胞的表达率在74%以上，其中CIK细胞上NKG₂D的表达水平在78%以上。