[发明专利]一种三七活血化瘀活性的检测方法

说明书

技术领域

本申请涉及中药材三七的质量控制领域，具体是涉及一种用于评估三七活血化瘀活性的检测方法，特别是涉及一种三七的抗血小板凝聚的生物活性检测方法。

背景技术

三七[panaxNotogrnseng(Burk)F·H·Chen]又名参三七、田七、南方人参，是五加科人参属植物，其根、叶、花等均具有药用价值。三七味甘、微苦，性温，归肝、胃、心、小肠经，具有止血、散瘀、消肿、止痛、补虚、强壮等功效，主治咯血、衄血、外伤出血、跌打肿痛等。医学家李时珍在《本草纲目》中认为三七能治一切血病。清朝医家赵学敏在《本草纲日拾遗》中写到：“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等”。三七主产于云南、广西及四川等地，云南省文山州为其原产地和主产地。据有关文献记载，三七使用历史近600年，栽培历史近500年。主要含有三七总皂苷及其它物质。根据研究资料证实三七总皂苷能有效改善血液循环的血流动力学，降低血液粘度，降低血脂等为现在常用药物。三七总皂苷是活血化淤的药物，已有药物成品。

现有技术中李春玲的《三七总皂苷的提取及纯化新工艺研究》中详细介绍了三七总皂苷的各种提取和纯化工艺。

目前评价药物活血化瘀活性的方法有很多，常用的有活化部分凝血酶法(APTT)、¹²⁵I-标记栓块溶解法、大鼠急性心肌缺血实验、小鼠急性脑缺血缺氧实验、小鼠体内血栓形成实验、小鼠断头存活实验、家兔体外抗血小板凝聚实验等。

郭玉东等建立了舒血宁注射液(银杏叶提取物)体外抑制血小板聚集的生物活性测定法用于补充银杏提取物的质量控制方法。主要以抑制家兔血小板聚集作用来考察显示舒血宁注射液量效关系和效价测定，标准物质选取了金纳多注射液。

CN1698629A公开了一种三七总皂苷口腔速释制剂，其中每片制剂含有三七总皂苷0.02-0.08g。其中三七总皂苷(血塞通)口腔速释制剂的活血化瘀作用的检测方法是采用TT、PT、APTT、FIB测定试剂盒，来测量对大鼠血凝及血小板聚集的影响，按比浊法测定ADP诱导的血小板聚集率，ADP的终浓度为6mol/l。然而，该方法也是定性指出三七总皂苷能抑制ADP诱导的血小板聚集。

CN1228960A公开一种血塞通胶囊，药液按重量每粒含有三七总皂苷40-250mg，并含有溶剂和稳定剂。其中采用血小板聚集仪来进行抗凝血实验。然而，该专利仅指出三七具有抗凝血活性，并没有公开一种简单、廉价、方便的测定三七活性的检测方法，特别是涉及量反应平行线法。

发明内容

本申请的目的是提供一种用于评估三七活血化瘀活性的方法，特别是提供一种用于评估三七生物活性的检测方法。

本申请采用量反应平行线法。药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者，称量反应。量反应检测用平行线测定法，要求在一定剂量范围内，S和T的对数剂量x和反应或反应的特定函数y呈直线关系，当S和T的活性组分基本相同时，两直线平行。此方法简单易行，平行性好，效率高，成本低廉。

具体地，本申请提供一种用于评估三七活血化瘀活性的方法，所述方法以三七抑制体外血小板聚集的效价P_T来评估三七活血化瘀活性，所述P_T按照2010年版《中国药典》生物检测统计法项下的量反应平行线法(3·3)法计算三七供试品的效价及实验误差，可信限率FL％不得超过40％，优选地不超过20％。其中抑制血小板聚集的含三七皂苷类供试品溶液的浓度在0.1-6mg/mL之间。

在本领域中，已有授权专利CN103352069A公开了一种用于评估何首乌及其中药制剂肝毒性效价检测方法，其生物毒性效价的计算按照量反应平行线法。

另有专利CN102662037公开了一种龙血竭的生物活性检测方法，其采用量反应平行线法来测定龙血竭的血小板抑制率和血浆复钙时间(PRT)。龙血竭为百合科植物剑叶龙血树的含脂木材经提取得到的树脂，完全不同于三七。

现有技术并没有将量反应平行线法用于三七的活血化瘀活性的测定，更没有对于公开检测方法中具体参数，所述参数对于更直观、快速有效地反应生物活性和疗效至关重要。

本发明另一方面是提供一种经简单、快速提取三七的方法，从而得到苷类，并进行检测的方法，从而用于评估三七的活血化瘀生物活性。

本发明是由以下方案实现的：

所述生物活血化瘀效价检测方法包括下述步骤：

a.配制供试品溶液

制备三七提取物；