[发明专利]一种三七活血化瘀活性的检测方法

权利要求书

1.一种三七活血化瘀活性的检测方法，所述检测方法包括下述步骤：

a.配制供试品溶液

(1)制备三七提取物；

(2)用生理盐水或者磷酸盐缓冲液配置所述三七提取物的供试品溶液，优选地用生理盐水配置所述三七提取物供试品溶液，超声助溶30min后，离心取上清，以微孔滤膜过滤除菌，备用，优选地用0.22μm微孔滤膜过滤除菌；

b.配制标准品溶液

(1)用生理盐水或者磷酸盐缓冲液配置所述标准物质溶液，所述标准物质为三七皂苷标准物质按比例混合物、三七总皂苷标准物质或三七总皂苷冻干粉，优选三七总皂苷冻干粉；

c.测定

(1)将标准物质溶液和血小板悬液两者加入到安瓿瓶中并混匀，然后将所述混匀的悬液加至血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录经标准物质抑制血小板聚集的曲线；

(2)将三七提取物供试品溶液和血小板悬液两者加入到安瓿瓶中并混匀，然后将所述混匀的悬液加至血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录经三七供试品抑制血小板聚集曲线；

d.生物活血化瘀效价计算

P_T＝A_T×R

R=dS3dT3·antilglgr·4(T1+T2+T3-S1-S2-S3)3(T3-T1+S3-S1)]]>

其中P_T为效价，A_T为估计效价，R是S和T等反应剂量d_S、d_T的比值，r是S和T相邻高低剂量组的比值，d_S、d_T为标准物质S和三七供试品T的等反应剂量。T1、T2、T3、S1、S2和S3中的1,2,3是顺次由小剂量到大剂量。

所述方法以三七抑制体外血小板聚集的效价P_T来评估三七活血化瘀活性，所述P_T按照2010年版《中国药典》生物检测统计法项下的量反应平行线法(3·3)法计算三七供试品的效价及实验误差，可信限率FL％不得超过40％，优选地不超过20％，其中抑制血小板聚集的含三七皂苷类供试品溶液的浓度在0.1～6mg/mL之间。

2.根据权利要求1所述的方法，血小板来源为大鼠、家兔或正常成年人，优选大鼠。

3.根据权利要求1所述的方法，所述方法中包括获得所述未经药物干预的血小板聚集曲线的步骤：

将血小板悬液放入血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录未经药物干预的诱导剂诱导的血小板聚集曲线，记录时间为300s，即得到所述未经药物干预的血小板聚集曲线，用于检验实验系统的可行性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，用于获得未经药物干预的血小板聚集曲线、标准物质的血小板聚集曲线或经三七干预的血小板聚集曲线的血小板数量范围为30-80万/μL，优选地为40万/μL。