[发明专利]乳制品中糠氨酸的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于食品添加剂的检测领域，具体涉及一种乳制品中糠氨酸的测定方法。

背景技术

牛奶对我国居民营养健康的贡献正处于快速增长期，到2004年全国人均奶占有量达18.8kg，但近一个时期，一些企业使用复原乳生产加工液态奶，在产品标识上误导消费者，严重损害了广大消费者和农牧民的合法权益，造成了行业内的不公平竞争，扰乱了行业秩序，影响了我国奶业健康发展。复原乳因受高温处理及长时间干燥贮存，其蛋白质结构紧密，与鲜奶比降低了吸收率和营养成分。因此，为保护生产者的合法经营和消费者的正当权益，区分生鲜乳和UHT灭菌乳中是否掺入复原乳具有重要意义。

生鲜乳中掺入复原乳及其检测方法，国外从20世纪80年代就有报道。例如，利用复原乳的荧光特性(Jenness,1984)、乳清蛋白热变性程度(Burton,1984)，牛乳中可溶性核苷酸(Gil等1982)、牛乳中脱氧核糖核酸酶与核糖核酸酶活性(Cantafora等，1979)等方法进行测定。但上述方法在应用上存在很多困难，主要受乳成分之间差异和杀菌方法(温度和时间)不同而影响。

牛乳在加热过程中会发生美拉德反应，使蛋白质和糖生成特定产物——糠氨酸(ε-N-2-呋喃甲基-L-赖氨酸)。糠氨酸作为巴氏杀菌乳中复原乳成分的标示物质，可鉴定巴氏杀菌乳中是否掺入复原乳。所以我们可以通过测定糠氨酸的含量来判断灭菌乳中是否含有复原乳。通常国家规定超高温灭菌乳中的糠氨酸的含量190mg/100g(蛋白质)即判定为复原乳。生乳中糠氨酸含量应低于7mg/100g；乳粉中糠氨酸含量大于135mg/100g；不含复原乳的巴氏杀菌乳中糠氨酸含量应小于12mg/100g。使用高效液相色谱(HPLC)紫外检测糠氨酸平均偏差5％(n＝5)；回收率为98.2％。

在对样品品质检验过程中，往往要对样品进行前处理，根据处理得到的样品纯度情况，再采用高效液相色谱、色谱-质谱/质谱联用等仪器进行检测。但由于这类仪器对样品的纯度要求较高，进而对样品的前处理的要求也较高。常规情况下，一般采用高温、高压的条件，去除样品处理过程中残留的盐类等物质。复原乳中糠氨酸的测定要经过水解、干过滤和预萃取、HPLC分析等多个过程，该方法检测耗费时间长、检测限高、干扰大、回收率低。乳制品中糠氨酸测定，常规方法是将样品置于耐热试管中，加入盐酸溶液，通入高纯度氮气，再置于干燥箱中，在120℃下加热水解23h～24h，冷却后干过滤、稀释、过萃取小柱净化，再接着应用高效液相进行检测。

发明内容

为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种乳制品中糠氨酸的测定方法，前处理节省时间，极大提高回收率，检测采用串联质谱，提高了特异性和灵敏度。

本发明的乳制品中的糠氨酸的测定方法，包括如下步骤：(1)试样制备；(2)净化；(3)液相色谱-串联质谱联用；所述步骤(1)按如下方法操作：

吸取2.00mL试样，置于带密闭的耐热试管，加入6mL的11.9mol/L浓盐酸，混匀；向试管中缓慢通入高纯度氮气1min～2min，密闭试管，然后将其置于干燥箱中，在115℃下加热水解4h；刚加热约1h后，轻轻摇动试管；加热结束后，将试管从干燥箱中取出，冷却后干过滤，保留滤液供测定。

所述步骤(2)按如下方法操作：0.10ml上清液于吹氮管，使用氮吹浓缩仪吹干后，用甲酸-甲酸铵缓冲溶液定容至1.00ml，充分摇匀后用1mL注射器过滤膜转移至进样瓶，液相色谱串联质谱测定。

所述步骤(3)的测定条件如下：色谱条件：

a)色谱柱：AB Eclipse XDB-C18(粒径5μm，4.6×150mm)，或相当者；

b)进样量：5μL；

c)柱温：23℃；

d)流速：0.5mL/min；

e)流动相：水92％，甲醇5％，甲酸-甲酸铵缓冲溶液3％；

f)洗脱条件：平衡5min,等度洗脱10min；

质谱条件：

a)离子化方式：电喷雾电离；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM)；

使用的雾化气、气帘气、辅助气和碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求。

本发明可检测的乳制品包括生乳、复原乳、巴氏杀菌乳或超高温瞬时杀菌乳。本发明的方法，前处理时间缩短，极大提高回收率，检测采用串联质谱，提高了特异性和灵敏度。

附图说明

图1是标准品的多反应监测(MRM)离子色谱图；