[发明专利]来源于抗生素溶杆菌OH13的吩嗪类化合物及其制备方法与应用在审
申请号: | 201510395261.2 | 申请日: | 2015-07-07 |
公开(公告)号: | CN104974100A | 公开(公告)日: | 2015-10-14 |
发明(设计)人: | 刘凤权;钱国良;赵杨扬;赵延存 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | C07D241/52 | 分类号: | C07D241/52;C07D241/46;C12P17/12;A01P1/00;C12R1/01 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 徐冬涛 |
地址: | 210014 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 来源于 抗生素 杆菌 oh13 吩嗪 化合物 及其 制备 方法 应用 | ||
技术领域
本发明涉及一类来源于抗生素溶杆菌OH13的具有抗细菌活性的吩嗪类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
近年来,天然产物作为抗菌药物,已广泛应用于临床医药和农业领域。细菌是天然产物的重要来源,主要产生菌包括放线菌(Actinomycetales)、芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、粘细菌(Mycobacteria)和蓝细菌(Cyanobacteria)等。
溶杆菌(Lysobacter spp.)属于黄单胞科、溶杆菌属。截止2014年底,国际上已报道的溶杆菌属细菌有32个种,其中产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)、抗生素溶杆菌(Lysobacter antibioticus)和胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus)对植物病原真菌、卵菌、革兰氏阴性细菌(G-)、阳性细菌(G+)和线虫都有显著的拮抗作用,是一类新型植物病害生防细菌。溶杆菌属细菌盛产小分子次生代谢产物,是天然产物新的来源。如,产酶溶杆菌中已报道可产生抗真菌物质HSAF及抗革兰氏阳性细菌物质WAP。
发明内容
本发明的目的在于提供一类来源于抗生素溶杆菌OH13的吩嗪类化合物及其制备方法;本发明的另一个目的在于提供吩嗪化合物在拮抗细菌中的应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
一种从抗生素溶杆菌OH13发酵液中分离纯化所得的吩嗪化合物,该吩嗪化合物的结构式如式Ⅰ~式Ⅵ:
本发明还提供了一种从抗生素溶杆菌OH13发酵液中分离纯化所得的吩嗪化合物的方法,该方法包括以下步骤:
第一步,抗生素溶杆菌OH13的种子液培养:挑取抗生素溶杆菌OH13菌种划线于NA培养基上,培养得平板菌种;从所述的平板菌种中挑取单菌落于NB培养液中,培养后得种子液;
第二步,抗生素溶杆菌OH13的发酵培养:将所述的种子液按接种于NB或10%TSB或R2A培养液中,在转速为180~300pm的条件下发酵20-24h,即得发酵液;
第三步,吩嗪化合物的提取:首先将发酵液离心后取上清液,之后将该上清液采用乙酸乙酯进行浸提萃取,萃取后蒸干乙酸乙酯后再用有机溶剂进行溶解,溶解后挥发掉有机溶剂,得到粗提物,将该粗提物在≤0℃的条件下保存待用;
第四步,吩嗪化合物的精制:将所述的粗提物溶于有机溶剂后再经葡聚糖凝胶柱层析分离,甲醇洗脱依次得到组分1~6;其中,组分6为式Ⅲ所示化合物,组分5用高效液相色谱进一步分离,得到式Ⅰ所示化合物、式Ⅱ所示化合物、式Ⅳ所示化合物、式Ⅴ所示化合物和式Ⅵ所示化合物。
本发明技术方案的第一步中,种子液的培养时间为24~36h。
本发明技术方案的第二步中,种子液的接种量为1~5%。
本发明技术方案的第三步中,有机溶剂为乙酸乙酯或甲醇或氯仿。
本发明技术方案的第四步中,所用的有机溶剂为甲醇和丙酮的混合液。在一些技术方案中,所用葡聚糖凝胶柱层析法的凝胶为LH-20,80g,甲醇等度洗脱,10-15秒/滴。在一些优选的技术方案中,所用的HPLC纯化条件:
色谱柱型号:Agilent Eclipse XDB-C18column,5μm,9.4×250mm;
流速:4mL/min;
检测波长:274nm;
流动相为:0min,20%乙腈,80%水;5min,45%乙腈,55%水;19min,50%乙腈,50%水;20min,60%乙腈,40%水;23-27min,100%乙腈;28-30min,20%乙腈,80%水。
本发明技术方案所述的吩嗪化合物(式Ⅰ~式Ⅵ所示化合物)在制备用于抗菌药物中应用。
本发明技术方案所述的吩嗪化合物(式Ⅰ~式Ⅵ所示化合物)在制备用于防治植物病原细菌药物中应用。
本发明所述的抗生素溶杆菌OH13为本实验室分离于水稻根际土壤的一株革兰氏阴性细菌。OH13已于2013年05月06日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC No.7561。
本发明的有益效果:
本发明提供了一种一类来源于抗生素溶杆菌OH13的吩嗪类化合物及其制备方法及应用,该吩嗪类化合物制备方法简单,抗菌效果明显。
附图说明
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