[发明专利]一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法

权利要求书

1.一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)先以EDC和NHS的缓冲液活化的羧基化的SPR芯片表面，再用缓冲液配制氨基末端的cDNA序列为5’-NH2-TCA GCG GGG AGG AAG GGA GTA AAG TTA ATA-3’溶液，将氨基末端的cDNA溶液加入SPR芯片表面，将cDNA以酰胺反应组装在SPR芯片表面，乙醇胺封闭界面作为传感界面对目标核酸的进行检测；

(2)加入目标DNA序列为5’-TCA GCG GGG AGG AAG GGA GTA AAG TTA ATA-3’缓冲液与传感界面进行杂交反应得到Au/cDNA/目标DNA组装层，实现对目标DNA的结合捕捉，完成检测步骤；

(3)用缓冲液分别配制序列为5’-CTT CCT CCC CGC TGA CAA AGT TCA GCG GGG-3’的颈环DNA H1溶液和序列为5’-TCA GCG GGG AGG AAG CCC CGC TGA ACT TTG-3’的颈环DNA H2溶液，溶液浓度均为5～10μM，将两种溶液混合后加热至90～95℃，维持5～10分钟，再迅速用冰水浴冷却至室温，即可完成杂交链循环反应形成长链dsDNA，将其与步骤2得到Au/cDNA/目标DNA组装层反应Au/cDNA/dsDNA组装层，在加入铁卟啉的缓冲液形成Au/cDNA/铁卟啉-dsDNA仿生催化剂；

(4)配制10～30mM 4-氯-1-萘酚乙醇溶液，再取1～2mL 4-氯-1-萘酚乙醇溶液与6～8mL缓冲液和2～5μL双氧水混合均匀作为信号放大液，加入步骤3得到的Au/cDNA/铁卟啉-dsDNA仿生催化剂表面进行氧化还原沉积反应，用SPR仪记录其信号响应。

2.如权利要求1所述的基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的羧基化的SPR芯片表面是将10～30mM巯基丙酸浸泡SPR芯片10～15小时实现。

3.如权利要求1所述的基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的氨基末端的cDNA溶液的浓度为1～5μM；乙醇胺浓度为10～30mM。

4.如权利要求1所述的基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的目标DNA缓冲液浓度为1～10⁵fM。

5.如权利要求1所述的基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的铁卟啉为FeTMPyP。

6.如权利要求1所述的基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，步骤(1)、(2)、(3)和(4)中，采用的缓冲液均为磷酸缓冲液，其浓度为0.5～1M；pH为7.2～7.4；内含0.2～0.25M氯化钠。