[发明专利]一种固定化单宁酶的制备方法

权利要求书

1.一种固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）先用无水乙醇振荡浸泡树脂1-3h,滤出树脂后再用丙酮振荡浸泡1-3h，把树脂滤出来后用蒸馏水振荡冲洗树脂至丙酮残留，备用；

（2）将单宁酶粗酶液于4000-5000r/min离心10min，取上清液进行超滤浓缩，浓缩液为超滤酶液；

（3）将步骤（1）处理后的树脂浸于戊二醛水溶液中使树脂充分交联，滤出树脂后加入到含超滤酶液的PBS缓冲液中，室温下搅拌使树脂充分吸附酶，滤出固体颗粒即为固定化单宁酶，4℃保藏。

2.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述树脂为交链苯乙烯型非极性大孔吸附树脂，孔容为3mL/g，孔径为120?，比表面积为550m²/g。

3.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述超滤所用纤维膜的切割分子量为10-20kDa，上清液超滤后浓缩4-6倍。

4.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述戊二醛水溶液浓度为1%-5%，交联时间为2-6h。

5.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述PBS缓冲液浓度为0.01-0.1mol/L，超滤酶液与PBS缓冲液体积比为0.001-0.01。

6.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，所述树脂投量和混合溶液的质量体积比为3%-6%，吸附时间为4-8h。

7.根据权利要求1所述的固定化单宁酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述PBS缓冲液配制的配制方法为：先配制A液和B液：称取7.16gNa₂HPO_4·12H₂O，蒸馏水定容于100mL，浓度为0.2mol/L，制得A液；称取3.12gNaH₂PO_4·2H₂O，蒸馏水定容于100mL，浓度为0.2mol/L，制得B液；取19mLA液和81mLB液混合，即得0.2mol/L的PBS缓冲液，再稀释可得0.01-0.1mol/L的PBS缓冲液。