[发明专利]一种结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA适配子及其制备方法

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv的DNA适配子，其特征在于：所述DNA适配子的核苷酸序列为：

5’-GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAATATCCCTATTCCGCTCCATGTTGCGTACCCGTGCCTTCGACATGAGGCCCGGATC-3’。

2.如权利要求1所述的DNA适配子在细菌学检测中的应用。

3.根据权利要求2所述的DNA适配子在细菌学检测中的应用，其特征在于，在检测结核分枝杆菌中的应用。

4.一种结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，包含有如权利要求1所述的DNA适配子。

5.一种制备如权利要求1所述的DNA适配子的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，构建随机单链寡核苷酸文库：设计合成78碱基的随机单链DNA文库：5’-GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAA-N₃₅-TTCGACATGAGGCCCGGATC-3’，其中N代表碱基AGCT中的任意一个，文库容量为10¹⁴-10¹⁵，并进一步纯化单链ssDNA文库用于结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv适配子的SELEX技术筛选；

步骤2，利用SELEX技术筛选H₃₇Rv适配子：用包被缓冲液将结核分枝杆菌标准株H37Rv包被于微孔板中，同时设空白反筛孔，非结核分枝杆菌和非分枝杆菌反筛孔；ssDNA文库和SELEX结合缓冲液混匀后先与空白反筛孔进行孵育；然后转移到H₃₇Rv包被孔进行孵育，SELEX冲洗缓冲液洗涤，甩干后加入SELEX洗脱缓冲液洗脱与H₃₇Rv结合的ssDNA，产物经酚氯仿抽提、乙醇沉淀纯化，PCR扩增后，进行10轮筛选，筛选后的饱和文库，经克隆测序，获得单个适配子。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2中使用的SELEX结合缓冲液成分为：20mmol/L Hepes，120mmol/L NaCl，5mmol/L KCl，1mmol/L CaCl₂，1mmol/L MgCl₂；SELEX结合缓冲液pH为7.35。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2中使用SELEX冲洗缓冲液成分为：20mmol/L Hepes，120mmol/L NaCl，5mmol/L KCl，1mmol/L CaCl₂，1mmol/L MgCl₂，0.05％Tween 20。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2中使用SELEX洗脱缓冲液成分为：20mmol/L Tris-HCl，4mol/L异硫氰酸胍，1mmol/L DTT；SELEX洗脱缓冲液pH为8.3。

9.一种三明治夹心ELISA检测方法，其特征在于：利用如权利要求1所述的结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv的DNA适配子进行检测。