[发明专利]一种利用菌株MQO-153制备精氨酸脱亚胺酶的方法

权利要求书

1.一种利用菌株MQO-153制备精氨酸脱亚胺酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)斜面培养：将菌株MQO-153在无菌条件下接种到斜面培养基上进行培养，培养温度为30℃，培养时间为24h；

斜面培养基为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，琼脂20g/L；pH为7.0-7.3；

(2)扩大培养：从步骤(1)的斜面培养基上挑取菌落，加水稀释获得菌体溶液，稀释后的浓度为3×10⁵-5×10⁵个/mL，将菌体溶液接种到种子培养基上，将种子培养基置于摇床中进行扩大培养，接种量为10％(v/v)，扩大培养的温度为30℃，培养时间为18h，摇床振幅为85mm，0-18h，摇床转速为100r/min；

种子培养基为：葡萄糖30g/L，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠15g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，VB₁·HCl 0.005g/L；pH为7.0，灭菌温度为115℃，灭菌时间为15min；

(3)发酵培养：将扩大培养后的菌体接种到发酵液体培养基中，接种量为10％(v/v)，接种时菌体溶液的浓度为3×10⁵-5×10⁵个/mL，培养条件为：培养温度30℃，培养时间28小时，摇床振幅85mm，0-10h，摇床转速100r/min，10-20h，摇床转速120r/min，20-28h，摇床转速100r/min；

发酵培养基为：葡萄糖3g/L，酵母膏10g/L，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，玉米浆5g/L，酵母膏1g/L，氯化钠5g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁0.5g/L，L-精氨酸5g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，VB₁·HCl 0.005g/L；pH为7.2，灭菌温度121℃，灭菌时间20min；

(4)30L发酵罐培养：将步骤(3)中发酵培养后的发酵液接种到30L发酵罐的培养基中，接种量为10％(v/v)，接种时菌体溶液的浓度为3×10⁵-5×10⁵个/mL，控制罐压强为0.05MPa，在35℃条件下培养24小时，搅拌转速600-800rpm，风量1：0.8vvm，控制溶氧量为30-40％，全程用无菌饱和氨水控制pH6.7-7.0，中途补糖控制残糖为1％，放罐残糖为0％，发酵后得到含有精氨酸脱亚胺酶菌体；

所述菌株MQO-153的保藏编号为CGMCC No.10726；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏日期为2015年4月21；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中斜面培养基的pH为7.2。

3.根据权利要求1所述的方法，所述步骤(1)中斜面培养基的灭菌温度为115℃，灭菌时间为15min。