[发明专利]一种非缺失型α-地中海贫血基因检测的核酸膜条、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种非缺失型α-地中海贫血基因检测的核酸膜条，包括一基底和固定于所述基底上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于，所述特异性寡核苷酸探针序列如：SEQ ID NO：1-6。

2.根据权利要求1所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的核酸膜条，其特征在于，所述基底为尼龙膜。

3.根据权利要求1所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的核酸膜条，其特征在于，所述特异性寡核苷酸探针的5’端或3’端进行氨基标记。

4.一种非缺失型α-地中海贫血基因检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任意一项所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的核酸膜条和PCR反应液，所述PCR反应液包括引物DF和引物D2，所述引物DF序列如：SEQ ID NO：7，所述引物D2序列如：SEQ ID NO：8。

5.根据权利要求4所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的试剂盒，其特征在于，所述引物DF序列的末端不进行标记，所述引物D2序列的5’末端进行生物素标记。

6.根据权利要求4所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应液各组分含量为：

10×PCR buffer：2.0-2.5μl；

25mmol/L MgCl₂：1.5-4.0μl；

10mmol/L dNTPs：0.25-0.75μl；

5mol/L甜菜碱：2.5-7.5μl

15μmol/L引物DF：0.83-1.67μl；

15μmol/L引物D2：0.83-1.67μl；

5U/μl Taq DNA聚合酶：0.3-0.7μl；

1U/μl UNG酶：0.05-0.2μl；

于所述PCR反应液的各组分中加入去离子水至总体积为20-30μl；所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP和dUTP，所述dATP、dGTP和dCTP的浓度分别为10mmol/L，所述dUTP的浓度为20mmol/L。

7.根据权利要求4所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应液采用dUTP/UNG酶防污染体系。

8.一种权利要求4-7任意一项所述的非缺失型α-地中海贫血基因检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，将提取的样本DNA加入PCR反应液中，进行PCR扩增，将PCR扩增后的PCR产物与所述特异性寡核苷酸探针杂交，然后依次进行洗膜和显色，所述PCR扩增的条件为：先于50℃扩增10分钟，然后于95℃扩增10min，再分别依次于94℃扩增30-90s、52-58℃扩增20-60s、72℃扩增30-90s，对上述依次于94℃扩增30-90s、52-58℃扩增20-60s、72℃扩增30-90s进行重复35-40个循环，然后于72℃扩增5min；所述杂交的温度为43℃±1℃。