[发明专利]一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种罗汉果甜苷V的分离方法，具体涉及一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法。

背景技术

罗汉果，拉丁学名Siratia grosvenorii，别名拉汉果，假苦瓜，原产广西桂林，其中永福县与龙胜县盛产，且品质较高，目前，在湖南、江西、广东等省也有种植。

罗汉果为一种药食同源的植物，即可用于制作饮品，也可入药，其营养丰富，极甘甜。研究表明，罗汉果中主要的甜味物质为罗汉果甜苷类物质，其中最主要的化学成分为罗汉果甜苷V，其甜度为蔗糖甜度的250倍以上，而热量仅为蔗糖的二十分之一。

罗汉果甜苷V是一种天然的甜味剂，其具有低热量、高甜度以及口感好等特点，颇受市场青睐。因罗汉果为我国特有的植物品种，对其开发具有独天得厚的优势。

近年来，国内对从罗汉果中提取罗汉果甜苷V进行了大量研究。

CN101029071A公开了一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果甜苷V的方法，该方法是以罗汉果干果为原料，经清洗破碎后，使用乙醇提取，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，过聚酰胺柱后，然后过硅胶层析、C18反相硅胶层析，经回收、干燥等产品，产品纯度≥95%，得率0.45～0.65%，罗汉果收率约45%。该方法由于经过多次萃取与层析，过程复杂，收率低，成本高，不适合工业生产。

CN104086614A公开一种适用于工业生产的罗汉果提取物的制备方法，该方法是将新鲜罗汉果破碎后，提取、浓缩、离心、超滤、大孔树脂多级吸附与分离，经纳滤、浓缩以及干燥后，可同时生产出四种不同规格的产品，罗汉果苷V总收率＞70%，该方法适合工厂化生产，但获得的产品纯度较低，且后续处理过程相对复杂。

CN101407535公开了一种高纯度罗汉果苷V的制备方法，该方法是以罗汉果甜甙粗品（含罗汉果甜甙V60%）为原料，使用甲醇溶解、过滤后，加入丙酮沉淀，将所获得沉淀进行正相硅胶吸附，最后经结晶与重结晶获得高纯度的罗汉果甜甙V产品，产品纯度≥99%，罗汉果苷V收率约60%，该方法制备的产品纯度高，但过程损耗较大，最终获得产品收率较低。

CN104530168A公开了一种罗汉果苷V的工业化制备方法，该方法是将罗汉果提取过滤后，使用制备液相色谱系统进行分离，经浓缩干燥得产品，产品纯度可达95%以上，该方法过程简单，产品纯度高，但因上柱前未经系统的过滤纯化处理，严重影响制备液相填料的使用效率与寿命，生产成本较高，且目前还停留在试验放大阶段，没有生产放大的实例。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种制备过程简单，便于规模化生产，产品纯度高的罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，包括以下步骤：

（1）溶解、过滤：取罗汉果粗制品，以固液比1:10～20加入甲醇进行溶解，过滤，得滤液；

（2）离心、超滤：将步骤（1）所得滤液进行离心，然后进行超滤，得超滤液；

（3）制备液相色谱分离：将步骤（2）所得超滤液注入动态轴向压缩制备液相色谱系统，然后用洗脱剂进行洗脱，收集目标段洗脱液；

（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得目标段洗脱液进行浓缩，然后干燥，得罗汉果甜苷V。

进一步，步骤（3）中，所述洗脱剂为甲醇与超纯水，洗脱方式为梯度洗脱。

进一步，所述洗脱为两段洗脱：先用甲醇/超纯水体积配比为30/70～80/15的混合溶液进行梯度洗脱20～28min，再用甲醇/超纯水体积配比为92/8～98/2的混合溶液进行梯度洗脱20～30min。

进一步，步骤（3）中，所述动态轴向压缩制备液相色谱系统中的动态轴压缩柱填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为5～20μm（优选8～12μm）；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。所述动态轴向压缩柱的规格优选Ф200×250mm。

进一步，在将步骤（2）所得超滤液注入动态轴压缩柱前先进行预柱处理，所述预柱的填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10～25μm（优选12～18μm）；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。所述预柱的规格优选Ф200×50mm。

步骤（3）中，在洗脱过程中在线检测洗脱液成分，确定目标段洗脱液的收集时间。

进一步，步骤（1）中，所述罗汉果粗制品中罗汉果甜苷V含量≥25%。所述罗汉果粗制品可通过现有传统的破碎、提取、树脂纯化、浓缩、干燥等工艺获得。