[发明专利]一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法

权利要求书

1.一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）溶解、过滤：取罗汉果粗制品，以固液比1:10～20加入甲醇进行溶解，过滤，得滤液；

（2）离心、超滤：将步骤（1）所得滤液进行管式离心，然后进行二次超滤，得超滤液；所述离心的速率为10000～15000r/min；所述二次超滤的超滤膜的截留分子量分别为3～5万道尔顿和4000～6000道尔顿；

（3）制备液相色谱分离：将步骤（2）所得超滤液注入动态轴向压缩制备液相色谱系统，然后用甲醇与超纯水进行梯度洗脱，收集目标段洗脱液；所述洗脱为两段洗脱：先用甲醇/超纯水体积配比为30/70～80/15的混合溶液进行梯度洗脱20～28min，再用甲醇/超纯水体积配比为92/8～98/2的混合溶液进行梯度洗脱20～30min；

（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得目标段洗脱液进行浓缩，然后干燥，得罗汉果甜苷V。

2.根据权利要求1所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（3）中，所述动态轴向压缩制备液相色谱系统中的动态轴压缩柱填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为5～20μm；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。

3.根据权利要求2所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：在将步骤（2）所得超滤液注入动态轴压缩柱前先进行预柱处理，所述预柱的填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10～25μm；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。

4.根据权利要求1～3之一所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述罗汉果粗制品中罗汉果甜苷V含量≥25%。

5.根据权利要求1～3之一所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述过滤的目数为100～300目。

6.根据权利要求4所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述过滤的目数为100～300目。

7.根据权利要求1～3之一所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为50～60℃，真空度为-0.08～-0.04Mpa，浓缩至百利度为20～30；所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa，干燥至水分含量≤5%。

8.根据权利要求4所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为50～60℃，真空度为-0.08～-0.04Mpa，浓缩至百利度为20～30；所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa，干燥至水分含量≤5%。

9.根据权利要求5所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为50～60℃，真空度为-0.08～-0.04Mpa，浓缩至百利度为20～30；所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa，干燥至水分含量≤5%。

10.根据权利要求6所述罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为50～60℃，真空度为-0.08～-0.04Mpa，浓缩至百利度为20～30；所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa，干燥至水分含量≤5%。