[发明专利]一种树突状细胞疫苗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种树突状细胞疫苗，其特征在于，所述树突状细胞疫苗的制备使用Oct4和Sox2基因高表达的肝癌细胞株；

所述制备疫苗的肝癌细胞株基因组的AAVS1位点中插入了Oct4和Sox2基因。

2.如权利要求1所述的树突状细胞疫苗，其特征在于，所述肝癌细胞株AAVS1位点位于基因编码的蛋白磷酸酶1调节亚基内，调节位于人类基因组的19号染色体亚基12C，即ppp1r12c上；是非致病性腺相关病毒的特异性结合位点2型。

3.如权利要求1所述的树突状细胞疫苗，其特征在于，所述插入肝癌细胞株AAVS1位点中的Oct4基因序列长度为1080；所述Sox2基因序列长度为951。

4.如权利要求1所述的树突状细胞疫苗，其特征在于，所述树突状细胞疫苗将肝癌干细胞通过细胞诱导技术诱导扩增而来。

5.如权利要求4所述的树突状细胞疫苗，其特征在于，所述肝癌干细胞是由修改后的Oct4和Sox2基因高表达的肝癌细胞株，通过肿瘤干细胞球体形成法富集而来。

6.一种制备如权利要求1所述的疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)采用杆状病毒-锌指核酸酶技术向肝癌细胞株基因组的AAVS1位点中插入Oct4和Sox2基因，制备得到修改后的肝癌细胞；

(2)对所述的修改后的肝癌细胞，采用肿瘤干细胞球体形成法富集类肝癌干细胞，提升肝癌干细胞标记物的表达；

(3)由自体血分离制备单核细胞，加入细胞因子诱导扩增抗原递呈树突状细胞，然后用类肝癌干细胞冻融裂解液刺激树突状细胞以获得负载肝癌干细胞抗原的抗原递呈树突状细胞。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的树突状细胞疫苗在制备用于肝癌免疫的药物中的应用。