[发明专利]一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及双孢蘑菇多糖的提取纯化方法，具体涉及一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法。

背景技术

在蘑菇罐头生产过程中，为钝化酶，软化组织，必须进行预煮，因此产生大量的预煮液。双孢蘑菇加工过程中产生大量的预煮液，大部分都被直接弃去，造成浪费。部分蘑菇罐头生产企业将蘑菇杀青水回收后通过蒸发浓缩10倍后得到蘑菇预煮液浓缩液，该浓缩液密度在1.4g/mL左右,pH偏酸在6.0左右，在生产上主要用于盐水菇罐头的复味，但用量很少，多数浓缩液未能得到利用，处于仓储状态。

双孢蘑菇预煮液浓缩液中固形物含量高，主要成分为氨基酸、多糖、核苷酸等，双孢蘑菇的大量鲜味成分和营养成分保留在预煮液中，因此对预煮液进行提取加工，充分利用其中的有效成分，可大大提高双孢蘑菇预煮液的利用价值，同时可大大降低对环境的污染。

发明内容

本发明的目的在于提高双孢蘑菇预煮液的利用价值，提供一种简单、高效的从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，包括以下步骤：

第一步：提取双孢蘑菇粗多糖

1)结晶过滤：将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上，并调节pH＝6左右，得到双孢蘑菇预煮液浓缩液，并在4℃冷藏24-72小时后，用筛网过滤去除结晶沉淀物，回收滤液，备用；所述结晶沉淀物主要为甘露醇、氨基酸和无机盐类的混合物；

2)醇沉过滤：向上述滤液中添加3-3.5倍体积的95％乙醇，沉淀20-24小时后，水浴加热醇沉液至50℃后，趁热过滤取沉淀物，将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖；滤液则可回收与结晶沉淀物一同用于提取其它成分或做风味剂；

通过该方法获得的蘑菇粗多糖中还含有大量的蛋白质和色素杂质，色泽黑褐色，粘度大，易吸湿，因此还需进一步纯化；

第二步：阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖

HZ-830酸性离子交换树脂的脱色和去蛋白的效果好，而且其多糖保留率也较高；而D303碱性离子交换树脂具有最高的多糖保留率，其脱色和脱蛋白的效果一般，但可用来和HZ-830串联使用吸附其中带负电荷的杂质，因此，选择HZ-830和D303型号的离子交换树脂用于双孢蘑菇粗多糖的纯化精制；

1)树脂柱准备：将HZ-830酸性离子交换树脂柱和D303碱性离子交换树脂柱串联，HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端，两种树脂等体积装柱，根据交换柱规格计算单柱体积BV，串联柱体积2BV；

2)上样：将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为20-30mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液，调节pH至7-8，通过恒流泵以2BV/h的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品，控制泵入样品总体积为5BV；

3)回收：在D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品，上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液，与样品合并，合并后的样品通过浓缩、醇沉、干燥，即得到精制的双孢蘑菇多糖。

所述双孢蘑菇预煮液的pH为6

进一步，所述树脂经过如下预处理：

HZ-830酸性离子交换树脂的预处理：用4％HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，再用2％NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，最后用4％HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，备用；

D303碱性离子交换树脂的预处理：用2％NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，再用4％HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，最后用2％NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，备用。

所述用于纯化的树脂柱长径比大于7，操作环境温度控制在23-27℃。

进一步，所述上样的的双孢蘑菇粗多糖溶液浓度为20mg/mL。

所述双孢蘑菇粗多糖溶液，以碳酸钠调节pH至7-8。

所述回收步骤中，浓缩、醇沉、干燥的具体操作如下：将合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后，加入4-4.5倍体积95％乙醇,沉淀20-24小时后，过滤取沉淀，再将沉淀至于50-60℃真空干燥2-3小时，即得到精制的双孢蘑菇多糖。