[发明专利]一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法

权利要求书

1.一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：其包括以下步骤：

第一步：提取双孢蘑菇粗多糖

1）结晶过滤：将双孢蘑菇加工过程中产生的双孢蘑菇预煮液浓缩至密度为1.5g/mL以上，得到双孢蘑菇预煮液浓缩液，并在4℃冷藏24-72 小时后，过滤去除结晶沉淀物，回收滤液，备用；

2）醇沉过滤：向上述滤液中添加3-3.5倍体积的95%乙醇，沉淀20-24小时后，水浴加热醇沉液至50℃后，趁热过滤取沉淀物，将沉淀物中的乙醇挥发即得到双孢蘑菇粗多糖；

第二步：阴、阳离子交换树脂串联纯化双孢蘑菇粗多糖

1）树脂柱准备：将HZ-830酸性离子交换树脂柱和D303碱性离子交换树脂柱串联，HZ-830酸性离子交换树脂柱出液端连接D303碱性离子交换树脂柱进液端，两种树脂等体积装柱，根据交换柱规格计算单柱体积BV，串联柱体积2BV；

2）上样：将上述双孢蘑菇粗多糖用纯水复溶为浓度为20-30mg/mL的双孢蘑菇粗多糖溶液，调节pH至7-8，通过恒流泵以2BV/h 的流速往HZ-830酸性离子交换树脂的进液端泵入样品，控制泵入样品总体积为5BV；

3）回收：在D303碱性离子交换树脂的出液端收集样品，上样结束后以1BV蒸馏水2BV/h流速洗脱并回收洗脱液，与样品合并，将合并后的样品通过旋转蒸发浓缩10倍后，加入4-4.5倍体积95%乙醇, 沉淀20-24小时后，过滤取沉淀，再将沉淀至于50-60℃真空干燥2-3小时，即得到精制的双孢蘑菇多糖。

2.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：所述双孢蘑菇预煮液的pH为6。

3.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：所述树脂经过如下预处理：

HZ-830酸性离子交换树脂的预处理：用浓度4%HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，再用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，最后用4%HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，备用；

D303碱性离子交换树脂的预处理：用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，再用浓度4%HCl溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，最后用浓度2%NaOH溶液浸泡4小时，用蒸馏水洗至pH呈中性，备用。

4.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：用于纯化的树脂柱长径比大于7，操作环境温度控制在23-27℃。

5.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：所述上样的的双孢蘑菇粗多糖溶液浓度为20mg/mL。

6.根据权利要求1所述的一种从双孢蘑菇预煮液中提取纯化双孢蘑菇多糖的方法，其特征在于：所述双孢蘑菇粗多糖溶液，以碳酸钠调节pH至7-8。