[发明专利]一种快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法

权利要求书

1.一种快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 无菌操作收集恶性胸腹水，分装于无菌离心管内，常温离心，得到细胞沉淀；

(2) 用无菌性PBS液体重悬细胞沉淀，得到肿瘤细胞混悬液，取肿瘤细胞混悬液沿离心管管壁加到离心管内的血清上，在离心管形成两层溶液，上层为肿瘤细胞混悬液层，下层为血清层；

(3) 将步骤(2)中的加入了肿瘤细胞混悬液的离心管静置5-8分钟，而后用巴氏吸管吸取管底部的血清且不破坏液体分层，取出的血清置于新的离心管中，加入无菌PBS液，常温离心，弃上清，获得纯化的肿瘤细胞。

2.根据权利要求1所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述步骤(1)的恶性胸腹水为血性胸腹水时，用红细胞裂解液收集并混匀所述细胞沉淀，常温离心，得到不含红细胞的细胞沉淀。

3.根据权利要求2所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述红细胞裂解液包含139.6 mmol/L NH₄Cl，16.96 mmol/L Tris， pH 7.2。

4.根据权利要求1或2所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)的血清相对于蒸馏水的比粘度为1.4-1.8。

5.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述的血清为人源血清或动物源血清。

6.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述血清为小牛血清。

7.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，肿瘤细胞混悬液的细胞浓度不超过10⁶个/ml；所述肿瘤细胞混悬液与血清之间的体积比为1:1-1.5，且血清高度不低于4cm。

8.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述步骤(3)中吸取管底部的血清的操作至少进行两次，每次吸取后，静置3-5分钟后再进行下一次吸取，每次吸取5-6ml血清。

9.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(3) 中的离心条件为：转速1000-2000r/min，离心时间3-6分钟。

10.根据权利要求4所述的快速高效的从恶性胸腹水中分离纯化肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述的无菌性PBS液体包含0.27g/L磷酸二氢钾，1.42g/L磷酸氢二钠，8g/L氯化钠，0.2g氯化钾，pH为7.2-7.4。