[发明专利]一种PRRSV、PCV2、PRV和CSFV的多重PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医药体外分子诊断技术领域，具体涉及一种 PRRSV、PCV2、PRV和CSFV的多重PCR检测试剂盒。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductive andrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的一种以猪繁殖障碍和呼 吸道系统疾病为主要症状的传染病。圆环病毒相关疾病(porcine circovirusassociateddiseases，PCVAD)是由圆环病毒2型(porcine circovirus2，PCV2)引起的一系列相关的临床疾病，其中包括仔猪断奶 后多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome， PMWS)，猪皮炎与肾病综合征(Porcinedermatitisandnephropathy syndrome，PDNS)和猪呼吸道疾病综合征(Porcinerespiratorydisease syndrome，PRDS)等。其中PMWS最为严重，可引起断奶仔猪渐进性 消瘦、呼吸困难、腹泻、贫血等症状。猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR) 是由伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一种以发热、奇痒、 急性脑脊髓炎等典型神经症状并具有致死性的急性传染病，感染猪后 可引起仔猪发病死亡，怀孕母猪流产、产死胎、木乃伊胎等症状。猪 瘟(Classicalswinefever，CSF)是由猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus， CSFV)引起的一种以急性出血和发热为主要特征的传染病。近年来， PRRS、PCVAD、PR和CSF已成为危害我国养猪业的主要疫病，给 我国养猪业造成了严重的经济损失。

由于这几种疾病在临床上往往呈现相似的症状，又常常发生混合 感染，且根据临床症状较难进行鉴别诊断，常规的血清学诊断方法又 存在操作复杂、费时费力费料、敏感性和特异性低等不足，与传统方 法相比，PCR方法具有快速、敏感和易于操作的特点，被广泛应用 于畜禽传染病检测和鉴别诊断中，有很多学者针对这四种病原建立了 该病原的PCR诊断方法，但是在感染多种病原时，不同的体系和程 序使得单重PCR方法操作步骤多且实际用量大。多重RT-PCR是在 常规PCR基础上改进并发展起来的一种PCR扩增技术。其基本原理 是在一个反应体系中同时加入多对引物，如果存在与各对引物特异互 补的模板，在同一反应体系中可同时扩增出多条目的DNA片段。多 重RT-PCR既有单个PCR的特异性和敏感性，又较之快捷、经济， 一次PCR反应，可同时检测多种病原。该方法可快速检测鉴别多种 病原体，在临床多种病原体混合感染的鉴别诊断上具有独特优势和很 高的实用价值。为此，开展了多重PCR技术检测这4种病的研究， 建立同时快速鉴别诊断这4种病毒的方法，并应用于临床实践中，以 期为这些疾病的防制和流行病学调查提供技术手段。

发明内容

本发明针对上述现有技术的不足，提供了一种猪繁殖与呼吸综合 征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪瘟病毒多重PCR检测 试剂盒及其检验方法，该试剂盒能够快速、特异的检测猪繁殖与呼吸 综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪瘟病毒。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种PRRSV、PCV2、PRV和CSFV的多重PCR检测试剂盒， 包括反转录体系、2×NanoPCRMix和引物组合物，其中所述的引物 组合物为：

PRRSV的上游引物SEQIDNO.1和下游引物SEQIDNO.2；

CSFV的上游引物SEQIDNO.3和下游引物SEQIDNO.4；

PCV2的上游引物SEQIDNO.5和下游引物SEQIDNO.6；

PRV的上游引物SEQIDNO.7和下游引物SEQIDNO.8。

所述的反转录体系为5×反转录缓冲液、dNTPMixture、反转录 酶、RNA酶抑制剂和反转录引物，所述的反转录酶为M-MLV反转 录酶，所述的反转录引物为SEQIDNO.2和SEQIDNO.4。

所述的2×PCRMix由DNA聚合酶、2×PCRbuffer和dNTP Mixture组成。