[发明专利]一种基于聚电解质多层膜基片电泳流动型ELISA方法

权利要求书

1.电泳流动型ELISA方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将第一抗体吸附到多孔膜基片上；

(2)吸附第一抗体的多孔膜基片再进行封闭剂蛋白吸附；

(3)电泳驱动抗原-第一抗体反应：将步骤(2)第一抗体和封闭剂蛋白吸附后的多孔膜基片固定在电泳装置中，电泳装置中多孔膜基片一侧注入抗原溶液，多孔膜基片另一侧注入磷酸盐缓冲溶液，若抗原分子为负电荷则抗原溶液侧插入负电极，另一侧插入正电极，反之则反；电极加电压，进行抗原-第一抗体反应；

(4)第二抗体-抗原反应，对酶标第二抗体进行显色定量：步骤(3)电泳驱动抗原-第一抗体反应后，将电泳后的多孔膜基片放入到第二抗体溶液中，进行反应，然后清洗，将所得多孔膜基片放入第二抗体标识酶的底物溶液中，进行显色；通过检测吸光度，进行抗原定量分析。

2.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤(1)多孔膜基片是醋酸纤维素多孔膜(CA)或聚电解质多层膜修饰的CA多孔膜，聚电解质多层膜修饰的CA多孔膜是依次利用聚(二烯丙基二甲基氯化铵)和聚苯乙烯硫酸钠交叉层叠修饰的CA多孔膜，且修饰的最外层是聚(二烯丙基二甲基氯化铵)，得到正电性的PDDA/PSS修饰CA，即PEMs-CA。

3.按照权利要求2的方法，其特征在于，PEMs-CA中聚(二烯丙基二甲基氯化铵)和聚苯乙烯硫酸钠交叉层叠修饰7层。

4.按照权利要求1的方法，其特征在于，步骤(3)电泳驱动抗原-第一抗体反应的电泳电压和电泳时间，电泳的电压大小决定蛋白质的移动速度；电泳时间的长短影响抗原和第一抗体结合的效率及自组装膜的稳定性。

5.按照权利要求1或2的方法，其特征在于，CA与PEMs-CA电泳电压与时间范围均为15-25V和2-8min。

6.按照权利要求5的方法，其特征在于，CA电泳电压与时间为15v、2min；PEMs-CA电泳电压与时间为25v、2min。