[发明专利]一种合成利那洛肽的方法

权利要求书

1.一种合成利那洛肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列Thr侧链上、Cys侧链上、Asn侧链上、Tyr侧链上、Glu侧链上偶联有保护基以及在C端偶联有树脂载体的利那洛肽树脂；

步骤2、利那洛肽树脂酸解脱除所有保护基和树脂载体得到利那洛肽线性粗肽，然后采用半胱氨酸盐酸盐/DMSO缓冲溶液对利那洛肽线性粗肽进行环化，按照其N端到C端的氨基酸顺序，形成第1位Cys和第6位Cys的二硫键、第2位Cys和第10位Cys的二硫键以及第5位Cys和第13位Cys的二硫键得到利那洛肽粗品，粗品纯化转醋酸盐后即得利那洛肽成品；

所述半胱氨酸盐酸盐/DMSO缓冲溶液pH值用氨水调至7.0-9.5，半胱氨酸盐酸盐浓度为1mmol/L，DMSO体积百分浓度为3-30％。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1为：

在偶联剂的作用下，将Fmoc-Tyr(tBu)-OH与树脂载体偶联后脱Fmoc保护基得到H-Tyr(tBu)-树脂载体，然后按照利那洛肽线性肽氨基酸序列，即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端到N端的顺序，在活化试剂和缩合试剂的作用下，依次逐个将剩余保护氨基酸进行延伸偶联，偶联后脱出N端保护基，得到利那洛肽树脂H-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-树脂载体；

所述剩余保护氨基酸N端保护基均为Fmoc保护基。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述偶联试剂为N,N-二异丙基乙胺、N,N-二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑/4-N,N-二甲基吡啶两种之一。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述树脂为Trityl-Cl类树脂或羟基类树脂。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述环化时间为1-4h。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述半胱氨酸盐酸盐/DMSO缓冲溶液用量为每0.5-3mg利那洛肽线性肽粗品使用1mL半胱氨酸盐酸盐/DMSO缓冲溶液。