[发明专利]一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法及应用

说明书

本发明公开了一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法及应用，属于细胞生物学技术领域。本发明所提供的方法为在体式显微镜下分离鹿皮中的完整毛囊，然后用胶原酶消化毛囊，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头，收集毛乳头，再用胶原酶消化基底膜，培养后获得毛乳头细胞。本发明方法培养成功率非常高，并且显著提高了毛乳头的贴壁率和细胞产量。利用本发明培养方法可以在4小时左右获得较纯的真皮毛乳头100个左右，将毛乳头进行接种培养7天左右即可获得大量的毛乳头细胞，适用于鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养。

技术领域

本发明涉及一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法及应用，属于细胞生物学技术领域。

背景技术

目前，毛乳头细胞培养技术主要针对人头皮的毛乳头细胞以及鼠胡须的毛乳头细胞，还没有针对鹿皮肤毛乳头细胞的培养技术，与人的毛发、鼠的胡须相比，鹿毛较细，鹿的真皮毛乳头较小，而且鹿的皮肤结构与人的头皮也存在着一定的差异，因此，现有的真皮毛乳头细胞的培养方法不适合于鹿的皮肤。现有的毛乳头细胞培养方法主要有显微解剖法，酶消化法，酶消化过滤法等。显微解剖法分离的毛乳头贴壁率很低，贴壁时间长，培养的成功率也较低。酶消化法对含毛囊的皮肤组织直接消化，产生很多皮肤组织碎片，使毛乳头很难收集，导致对毛乳头的消化程度不均一，影响毛乳头的收集。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法，该方法是在体式显微镜下分离鹿皮中的完整毛囊，然后用胶原酶消化毛囊，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头，收集毛乳头，再用胶原酶消化基底膜，培养后获得毛乳头细胞。

所述方法步骤如下：

1)利用体式显微镜分离鹿皮中的毛囊，获得完整毛囊；

2)利用胶原酶消化步骤1)所得的完整毛囊，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头；

3)收集步骤2)中所得的毛乳头，再用胶原酶消化基底膜，然后利用添加FBS的DMEM培养基进行培养，获得毛乳头细胞。

优选地，步骤1)所述分离，是将鹿的皮条沿毛囊生长方向切成薄片，从薄片中拔出完整毛囊。

优选地，步骤2)所述胶原酶，为Ⅱ型胶原酶。

优选地，步骤2)所述消化，为37℃消化30min。

优选地，步骤3)所述胶原酶，为Ⅳ型胶原酶。

优选地，步骤3)所述消化，为37℃消化15～20min。

优选地，步骤3)所述培养，是利用添加FBS的DMEM培养基在37℃、5％CO₂和饱和湿度的条件下进行培养。

优选地，所述方法具体步骤为：

1)将活体采集的鹿的皮肤切成皮条经过消毒处理后，沿毛囊生长方向切成薄片，在体式显微镜下，从薄片中拔出完整毛囊，获得完整毛囊；

2)利用Ⅱ型胶原酶在37℃下消化步骤1)所得的完整毛囊30min，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头；

3)收集步骤2)中所得的毛乳头，再用Ⅳ型胶原酶于37℃消化基底膜15～20min，然后利用添加FBS的DMEM培养基在37℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下进行培养，获得毛乳头细胞。

以上所述任一方法，适用于鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养。

本发明有益效果：