[发明专利]一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法及应用

权利要求书

1.一种鹿真皮毛乳头细胞的体外分离培养方法，其特征在于，步骤如下：

1)利用体式显微镜分离鹿皮肤中的毛囊，获得完整毛囊；

2)利用Ⅱ型胶原酶消化步骤1)所得的完整毛囊，消化条件为37℃消化30min，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头；

3)收集步骤2)中所得的毛乳头，再用Ⅳ型胶原酶消化基底膜，消化条件为37℃消化15～20min，然后利用DMEM+15％FBS培养基进行培养，获得毛乳头细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述分离，是将鹿的皮条沿毛囊生长方向切成薄片，从薄片中拔出完整毛囊。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述培养，是在37℃、5％CO₂和饱和湿度的条件下进行培养。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，具体步骤为：

1)将活体采集的鹿的皮肤切成皮条经过消毒处理后，沿毛囊生长方向切成薄片，在体式显微镜下，从薄片中拔出完整毛囊，获得完整毛囊；

2)利用Ⅱ型胶原酶在37℃下消化步骤1)所得的完整毛囊30min，切下含毛乳头的毛囊球部，剥离毛根鞘，获得毛乳头；

3)收集步骤2)中所得的毛乳头，再用Ⅳ型胶原酶于37℃消化基底膜15～20min，然后利用添加FBS的DMEM培养基在37℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下进行培养，获得毛乳头细胞。