[发明专利]基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法

权利要求书

1.基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将含有目的基因的农杆菌工程菌接种到含有筛选压的液体培养基中进行扩大培养，当菌液OD600值达到0.8～1.2时分离菌体，用悬浮培养基重悬浮，再加入乙酰丁香酮，获得农杆菌工程菌转化液；所述悬浮培养基为含有渗透剂和表面活性剂的1/2MS培养基；

（2）选取待转化桑树品种枝条上将要萌发且个体体型较大的冬芽，将冬芽生长点刺伤后注入农杆菌工程菌转化液至溢出为止，用脱脂棉包裹注射后的冬芽；重复此步骤向选取冬芽连续注射农杆菌工程菌转化液5～7次，每天1次；

（3）对注射后冬芽长出的叶片进行转基因鉴定，筛选出阳性枝条；

（4）筛选出的阳性枝条通过嫁接无性繁殖或桑雌果和雄花的杂交有性繁殖获得转基因嫁接桑苗或转基因桑树种子。

2.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，步骤（1）中所述农杆菌为根瘤农杆菌LBA4404。

3.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，步骤（1）中所述悬浮培养基为含有5wt% D-葡萄糖、0.05wt% Silwet L-77和0.05wt% MES的1/2MS培养基。

4.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，步骤（1）中所述菌体用悬浮培养基按体积比1:1重悬浮。

5.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，步骤（1）中所述农杆菌工程菌转化液中乙酰丁香酮的终浓度为100～200 μmol/L。

6.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，所述桑树品种为红果1号和珍珠白。